安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2008年
4期
376-380
,共5页
余莉%李霞%郜玉峰%罗庆礼%乔增培%沈继龙
餘莉%李霞%郜玉峰%囉慶禮%喬增培%瀋繼龍
여리%리하%고옥봉%라경례%교증배%침계룡
嘌呤类/代谢%次黄嘌呤磷酸核糖转移酶%RNA,小分子干扰
嘌呤類/代謝%次黃嘌呤燐痠覈糖轉移酶%RNA,小分子榦擾
표령류/대사%차황표령린산핵당전이매%RNA,소분자간우
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)在弓形虫体内的对目的 基因的表达调节作用.方法 以弓形虫嘌呤代谢过程中的关键酶--次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)编码基因为靶标,合成3对siRNA,以电穿孔的方式将不同的浓度的siRNA转染弓形虫.采用荧光定量PCR及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别检测弓形虫HXGPRT mRNA及酶合成量.结果 在针对HXGPRT编码基因设计的3对21 nt的siRNA中,有1对(siRNA415)能明显降低HXGPRT mRNA水平及酶合成量.在转染后24 h,4 μmol/L siRNA415电转弓形虫的HXGPRT mRNA水平及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别降为模拟电转弓形虫的0.36±0.04及0.51±0.03倍(P<0.05).结论 21 nt的siRNA在弓形虫体内能有效抑制目的 基因的表达.siRNA在弓形虫体内的应用将为阐明未知基因的功能和抗弓形虫药物的筛选提供有力的工具.
目的 探討小榦擾RNA(siRNA)在弓形蟲體內的對目的 基因的錶達調節作用.方法 以弓形蟲嘌呤代謝過程中的關鍵酶--次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥嘌呤燐痠覈糖轉移酶(HXGPRT)編碼基因為靶標,閤成3對siRNA,以電穿孔的方式將不同的濃度的siRNA轉染弓形蟲.採用熒光定量PCR及[3H]-次黃嘌呤攝入量分彆檢測弓形蟲HXGPRT mRNA及酶閤成量.結果 在針對HXGPRT編碼基因設計的3對21 nt的siRNA中,有1對(siRNA415)能明顯降低HXGPRT mRNA水平及酶閤成量.在轉染後24 h,4 μmol/L siRNA415電轉弓形蟲的HXGPRT mRNA水平及[3H]-次黃嘌呤攝入量分彆降為模擬電轉弓形蟲的0.36±0.04及0.51±0.03倍(P<0.05).結論 21 nt的siRNA在弓形蟲體內能有效抑製目的 基因的錶達.siRNA在弓形蟲體內的應用將為闡明未知基因的功能和抗弓形蟲藥物的篩選提供有力的工具.
목적 탐토소간우RNA(siRNA)재궁형충체내적대목적 기인적표체조절작용.방법 이궁형충표령대사과정중적관건매--차황표령、황표령、조표령린산핵당전이매(HXGPRT)편마기인위파표,합성3대siRNA,이전천공적방식장불동적농도적siRNA전염궁형충.채용형광정량PCR급[3H]-차황표령섭입량분별검측궁형충HXGPRT mRNA급매합성량.결과 재침대HXGPRT편마기인설계적3대21 nt적siRNA중,유1대(siRNA415)능명현강저HXGPRT mRNA수평급매합성량.재전염후24 h,4 μmol/L siRNA415전전궁형충적HXGPRT mRNA수평급[3H]-차황표령섭입량분별강위모의전전궁형충적0.36±0.04급0.51±0.03배(P<0.05).결론 21 nt적siRNA재궁형충체내능유효억제목적 기인적표체.siRNA재궁형충체내적응용장위천명미지기인적공능화항궁형충약물적사선제공유력적공구.
