南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
4期
633-636
,共4页
付喜花%梁蔚芳%吴小东%沈国俊%何海棠%陈金军%侯金林
付喜花%樑蔚芳%吳小東%瀋國俊%何海棠%陳金軍%侯金林
부희화%량위방%오소동%침국준%하해당%진금군%후금림
鸭乙型肝炎病毒%定点突变%鸡肝癌细胞系%拉米夫定
鴨乙型肝炎病毒%定點突變%鷄肝癌細胞繫%拉米伕定
압을형간염병독%정점돌변%계간암세포계%랍미부정
目的 构建鸭乙型肝炎病毒(DHBV)YMDD点突变的复制质粒,研究其在鸡肝癌细胞中的复制及拉米夫定抗性.方法 以广东樱桃谷鸭DHBV分离株为模板,将3631 bp的片段克隆至载体pBluescript Ⅱ KS(+)中,构建含1.2倍病毒全基因的重组质粒,经PCR定点突变获得YMDD突变株.将构建质粒经FuGENETM 6瞬时转染鸡肝癌细胞,分析变异株的复制能力及拉米夫定耐药性.结果 PCR鉴定、酶切鉴定及序列测定均证实成功获得1.2倍DHBV全基因YMDD突变质粒.Southern印迹杂交表明重组质粒转染细胞后可检测到病毒复制中间体;野生株的复制能力是突变株的2.7倍.拉米夫定对变异株的IC50=37.12+8.81 ng/ml,高于野生株的IC50=10.90±4.80 ng/ml.结论 与野生株相比,YMDD突变株质粒体外复制活性减弱,对拉米夫定敏感性下降.
目的 構建鴨乙型肝炎病毒(DHBV)YMDD點突變的複製質粒,研究其在鷄肝癌細胞中的複製及拉米伕定抗性.方法 以廣東櫻桃穀鴨DHBV分離株為模闆,將3631 bp的片段剋隆至載體pBluescript Ⅱ KS(+)中,構建含1.2倍病毒全基因的重組質粒,經PCR定點突變穫得YMDD突變株.將構建質粒經FuGENETM 6瞬時轉染鷄肝癌細胞,分析變異株的複製能力及拉米伕定耐藥性.結果 PCR鑒定、酶切鑒定及序列測定均證實成功穫得1.2倍DHBV全基因YMDD突變質粒.Southern印跡雜交錶明重組質粒轉染細胞後可檢測到病毒複製中間體;野生株的複製能力是突變株的2.7倍.拉米伕定對變異株的IC50=37.12+8.81 ng/ml,高于野生株的IC50=10.90±4.80 ng/ml.結論 與野生株相比,YMDD突變株質粒體外複製活性減弱,對拉米伕定敏感性下降.
목적 구건압을형간염병독(DHBV)YMDD점돌변적복제질립,연구기재계간암세포중적복제급랍미부정항성.방법 이엄동앵도곡압DHBV분리주위모판,장3631 bp적편단극륭지재체pBluescript Ⅱ KS(+)중,구건함1.2배병독전기인적중조질립,경PCR정점돌변획득YMDD돌변주.장구건질립경FuGENETM 6순시전염계간암세포,분석변이주적복제능력급랍미부정내약성.결과 PCR감정、매절감정급서렬측정균증실성공획득1.2배DHBV전기인YMDD돌변질립.Southern인적잡교표명중조질립전염세포후가검측도병독복제중간체;야생주적복제능력시돌변주적2.7배.랍미부정대변이주적IC50=37.12+8.81 ng/ml,고우야생주적IC50=10.90±4.80 ng/ml.결론 여야생주상비,YMDD돌변주질립체외복제활성감약,대랍미부정민감성하강.
