中华损伤与修复杂志（电子版）
中華損傷與脩複雜誌（電子版）
중화손상여수복잡지（전자판）
Chinese Journal of Injury Repair and Wound Healing
2011年
1期
20-32
,共13页
吕国忠%周红梅%赵朋%苗宗宁%钱海鑫
呂國忠%週紅梅%趙朋%苗宗寧%錢海鑫
려국충%주홍매%조붕%묘종저%전해흠
烧伤%表皮干细胞%纳米技术%组织工程%创伤和损伤
燒傷%錶皮榦細胞%納米技術%組織工程%創傷和損傷
소상%표피간세포%납미기술%조직공정%창상화손상
目的 探讨表皮干细胞联合成纤维细胞-丝素蛋白纳米纤维活性支架体内培养,对Ⅲ度烧伤创面的修复和再生作用.方法 (1)表皮干细胞的培养和表征:采用快速贴壁法分离和培养表皮干细胞(Epidermal Stem Cell,ESC).将表皮干细胞分别在经Ⅳ型胶原蛋白修饰的和未经修饰的培养瓶中,或通过悬浮法培养,研究表皮干细胞的生长特性;以βl整合素和细胞角蛋白CK19免疫荧光染色实验考察细胞表型.(2)活性支架的体外构建和对大鼠Ⅲ度创面的修复作用研究:体外构建成纤维细胞-丝素蛋白纳米纤维活性支架;采取同体对照法,在20只Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)背部制作两个Ⅲ度切痂创面.左侧创面采用体外培养的自体表皮干细胞联合成纤维细胞-丝素蛋白纳米纤维活性支架移植入创面,作为组织工程移植物组;右侧创面采用凡士林纱布敷料覆盖,作为凡士林纱布敷料组.考察组织工程移植物对大鼠Ⅲ度创面的愈合作用.结果 以快速贴壁法能够有效地分离得到表皮干细胞,细胞在经Ⅳ型胶原蛋白修饰的培养瓶中生长10 d后融合,数目达到5.1×105/cm2.免疫荧光实验表明细胞表面抗原呈βl整合素和角蛋白免疫CK19成阳性,证明分离得到的细胞为表皮干细胞.成纤维细胞能够在丝素蛋白纳米纤维中扩增并分泌细胞外基质,14 d后与丝素蛋白纳米纤维形成活性支架.对大鼠Ⅲ度烧伤创面的修复实验表明,组织工程移植物组的创面在第14天和第22天的平均愈合效率为66%和93%,高于凡士林纱布敷料组(32%和69%),P＜0.05.组织工程移植物组的创面平均愈合天数为21 d,低于凡士林纱布敷料组(31 d),P＜0.05.结论 通过Ⅳ型胶原蛋白黏附法,能够分离得到表皮干细胞,并且其在Ⅳ型胶原蛋白表面修饰的培养瓶中的生长活力较高.大鼠Ⅲ度创面的修复实验表明,组织工程移植物,即表皮干细胞联合成纤维细胞-丝素蛋白纳米纤维支架,能够修复Ⅲ度创面,再生皮肤表真皮结构完整;并且与凡士林纱布敷料相比,能够提高创面的愈合效率,减少创面的愈合时间.
目的 探討錶皮榦細胞聯閤成纖維細胞-絲素蛋白納米纖維活性支架體內培養,對Ⅲ度燒傷創麵的脩複和再生作用.方法 (1)錶皮榦細胞的培養和錶徵:採用快速貼壁法分離和培養錶皮榦細胞(Epidermal Stem Cell,ESC).將錶皮榦細胞分彆在經Ⅳ型膠原蛋白脩飾的和未經脩飾的培養瓶中,或通過懸浮法培養,研究錶皮榦細胞的生長特性;以βl整閤素和細胞角蛋白CK19免疫熒光染色實驗攷察細胞錶型.(2)活性支架的體外構建和對大鼠Ⅲ度創麵的脩複作用研究:體外構建成纖維細胞-絲素蛋白納米纖維活性支架;採取同體對照法,在20隻Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)揹部製作兩箇Ⅲ度切痂創麵.左側創麵採用體外培養的自體錶皮榦細胞聯閤成纖維細胞-絲素蛋白納米纖維活性支架移植入創麵,作為組織工程移植物組;右側創麵採用凡士林紗佈敷料覆蓋,作為凡士林紗佈敷料組.攷察組織工程移植物對大鼠Ⅲ度創麵的愈閤作用.結果 以快速貼壁法能夠有效地分離得到錶皮榦細胞,細胞在經Ⅳ型膠原蛋白脩飾的培養瓶中生長10 d後融閤,數目達到5.1×105/cm2.免疫熒光實驗錶明細胞錶麵抗原呈βl整閤素和角蛋白免疫CK19成暘性,證明分離得到的細胞為錶皮榦細胞.成纖維細胞能夠在絲素蛋白納米纖維中擴增併分泌細胞外基質,14 d後與絲素蛋白納米纖維形成活性支架.對大鼠Ⅲ度燒傷創麵的脩複實驗錶明,組織工程移植物組的創麵在第14天和第22天的平均愈閤效率為66%和93%,高于凡士林紗佈敷料組(32%和69%),P＜0.05.組織工程移植物組的創麵平均愈閤天數為21 d,低于凡士林紗佈敷料組(31 d),P＜0.05.結論 通過Ⅳ型膠原蛋白黏附法,能夠分離得到錶皮榦細胞,併且其在Ⅳ型膠原蛋白錶麵脩飾的培養瓶中的生長活力較高.大鼠Ⅲ度創麵的脩複實驗錶明,組織工程移植物,即錶皮榦細胞聯閤成纖維細胞-絲素蛋白納米纖維支架,能夠脩複Ⅲ度創麵,再生皮膚錶真皮結構完整;併且與凡士林紗佈敷料相比,能夠提高創麵的愈閤效率,減少創麵的愈閤時間.
목적 탐토표피간세포연합성섬유세포-사소단백납미섬유활성지가체내배양,대Ⅲ도소상창면적수복화재생작용.방법 (1)표피간세포적배양화표정:채용쾌속첩벽법분리화배양표피간세포(Epidermal Stem Cell,ESC).장표피간세포분별재경Ⅳ형효원단백수식적화미경수식적배양병중,혹통과현부법배양,연구표피간세포적생장특성;이βl정합소화세포각단백CK19면역형광염색실험고찰세포표형.(2)활성지가적체외구건화대대서Ⅲ도창면적수복작용연구:체외구건성섬유세포-사소단백납미섬유활성지가;채취동체대조법,재20지Sprague-Dawley대서(SD대서)배부제작량개Ⅲ도절가창면.좌측창면채용체외배양적자체표피간세포연합성섬유세포-사소단백납미섬유활성지가이식입창면,작위조직공정이식물조;우측창면채용범사림사포부료복개,작위범사림사포부료조.고찰조직공정이식물대대서Ⅲ도창면적유합작용.결과 이쾌속첩벽법능구유효지분리득도표피간세포,세포재경Ⅳ형효원단백수식적배양병중생장10 d후융합,수목체도5.1×105/cm2.면역형광실험표명세포표면항원정βl정합소화각단백면역CK19성양성,증명분리득도적세포위표피간세포.성섬유세포능구재사소단백납미섬유중확증병분비세포외기질,14 d후여사소단백납미섬유형성활성지가.대대서Ⅲ도소상창면적수복실험표명,조직공정이식물조적창면재제14천화제22천적평균유합효솔위66%화93%,고우범사림사포부료조(32%화69%),P＜0.05.조직공정이식물조적창면평균유합천수위21 d,저우범사림사포부료조(31 d),P＜0.05.결론 통과Ⅳ형효원단백점부법,능구분리득도표피간세포,병차기재Ⅳ형효원단백표면수식적배양병중적생장활력교고.대서Ⅲ도창면적수복실험표명,조직공정이식물,즉표피간세포연합성섬유세포-사소단백납미섬유지가,능구수복Ⅲ도창면,재생피부표진피결구완정;병차여범사림사포부료상비,능구제고창면적유합효솔,감소창면적유합시간.
