生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
631-635
,共5页
管张燕%王芃%陶好霞%袁盛凌%王艳春%申严杰%王令春%刘纯杰
管張燕%王芃%陶好霞%袁盛凌%王豔春%申嚴傑%王令春%劉純傑
관장연%왕봉%도호하%원성릉%왕염춘%신엄걸%왕령춘%류순걸
幽门螺杆菌%CagA蛋白%磷脂酰丝氨酸%原核表达%纯化
幽門螺桿菌%CagA蛋白%燐脂酰絲氨痠%原覈錶達%純化
유문라간균%CagA단백%린지선사안산%원핵표체%순화
目的:表达和纯化幽门螺杆菌不同菌株的CagA蛋白N端片段,检测其与磷脂酰丝氨酸(PS)的相互作用及亲和力.方法:用PCR方法从幽门螺杆菌3个菌株中扩增出CagA蛋白N端基因,并连接到表达载体pET-28a上；转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导可溶性表达CagA蛋白N端880残基片段；经镍柱亲和纯化后,利用PLOA法检测CagA蛋白与PS的相互作用.结果:构建了3种幽门螺杆菌菌株cagA基因的原核表达质粒pET-28a/cagA199、pET-28a/cagA11637及pET-28a/cagASSI,并在大肠杆菌中获得可溶性表达,SDS-PAGE和Western印迹证实得到目标融合蛋白,亲和纯化得到高纯度CagA蛋白.PLOA结果表明,CagA蛋白与PS有明显的相互作用.结论:3种幽门螺杆菌菌株CagA蛋白与PS之间存在相互作用,且不同的CagA与PS有不同的亲和力.
目的:錶達和純化幽門螺桿菌不同菌株的CagA蛋白N耑片段,檢測其與燐脂酰絲氨痠(PS)的相互作用及親和力.方法:用PCR方法從幽門螺桿菌3箇菌株中擴增齣CagA蛋白N耑基因,併連接到錶達載體pET-28a上；轉化大腸桿菌BL21,經IPTG誘導可溶性錶達CagA蛋白N耑880殘基片段；經鎳柱親和純化後,利用PLOA法檢測CagA蛋白與PS的相互作用.結果:構建瞭3種幽門螺桿菌菌株cagA基因的原覈錶達質粒pET-28a/cagA199、pET-28a/cagA11637及pET-28a/cagASSI,併在大腸桿菌中穫得可溶性錶達,SDS-PAGE和Western印跡證實得到目標融閤蛋白,親和純化得到高純度CagA蛋白.PLOA結果錶明,CagA蛋白與PS有明顯的相互作用.結論:3種幽門螺桿菌菌株CagA蛋白與PS之間存在相互作用,且不同的CagA與PS有不同的親和力.
목적:표체화순화유문라간균불동균주적CagA단백N단편단,검측기여린지선사안산(PS)적상호작용급친화력.방법:용PCR방법종유문라간균3개균주중확증출CagA단백N단기인,병련접도표체재체pET-28a상；전화대장간균BL21,경IPTG유도가용성표체CagA단백N단880잔기편단；경얼주친화순화후,이용PLOA법검측CagA단백여PS적상호작용.결과:구건료3충유문라간균균주cagA기인적원핵표체질립pET-28a/cagA199、pET-28a/cagA11637급pET-28a/cagASSI,병재대장간균중획득가용성표체,SDS-PAGE화Western인적증실득도목표융합단백,친화순화득도고순도CagA단백.PLOA결과표명,CagA단백여PS유명현적상호작용.결론:3충유문라간균균주CagA단백여PS지간존재상호작용,차불동적CagA여PS유불동적친화력.
