铜绿假单胞菌Quorum-Sensing系统中rhlR基因的克隆表达及其免疫保护性研究
동록가단포균Quorum-Sensing계통중rhlR기인적극륭표체급기면역보호성연구
The Cloning and Expression of rhlR, a Quorum Sensing Gene in Pseudomonas aeruginosa PAO1, and a Study of Its Effect on Bacterial Clearance Rate in Mouse Lung
  • 万方数据
    四川大学学报（医学版） 사천대학학보（의학판）
    JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
    2006年 5期 661-665 ,共5页

    杜宝中%谢轶%贾文祥%杨发龙%曾蔚%杨维青%程曦%陈恬%张再蓉

    두보중%사질%가문상%양발룡%증위%양유청%정희%진념%장재용

    铜绿假单胞菌%基因表达%rhlR基因%免疫原性 銅綠假單胞菌%基因錶達%rhlR基因%免疫原性
    동록가단포균%기인표체%rhlR기인%면역원성
    目的 研究铜绿假单胞菌rhlR表达产物的分子生物学特性,以及对小鼠的免疫保护作用.方法 以铜绿假单胞菌标准株PAO1的基因组DNA为模板,PCR方法 扩增rhlR基因.利用pGEX4T-1载体构建rhlR-pGEX4T-1重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用免疫印迹验证.同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率.结果 rhlR的全基因序列为726 bp,经序列分析和同源性比较,与GenBank中的rhlR基因(登录号:AE004768)完全一致.大肠杆菌BL21(DE3)转化重组质粒rhlR-pGEX4T-1后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达的融合蛋白质相对分子质量为54×103,其中RhlR蛋白为27×103.体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率与未经免疫的正常组比较,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 构建的rhlR-pGEX4T-1重组质粒能够在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出具有生物学活性的RhlR蛋白.重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用.
    목적 연구동록가단포균rhlR표체산물적분자생물학특성,이급대소서적면역보호작용.방법 이동록가단포균표준주PAO1적기인조DNA위모판,PCR방법 확증rhlR기인.이용pGEX4T-1재체구건rhlR-pGEX4T-1중조질립,재대장간균BL21(DE3)중유도표체,병용면역인적험증.동시용순화적중조단백면역소서,균락계수법검측면역조화대조조서폐대동록가단포균적청제솔.결과 rhlR적전기인서렬위726 bp,경서렬분석화동원성비교,여GenBank중적rhlR기인(등록호:AE004768)완전일치.대장간균BL21(DE3)전화중조질립rhlR-pGEX4T-1후,경IPTG유도화SDS-PAGE분석,표체적융합단백질상대분자질량위54×103,기중RhlR단백위27×103.체내실험중,면역소서폐부대동록가단포균적청제솔여미경면역적정상조비교,차이유통계학의의(P＜0.05). 결론 구건적rhlR-pGEX4T-1중조질립능구재대장간균BL21(DE3)중성공지표체출구유생물학활성적RhlR단백.중조단백대소서표현출일정적보호작용.
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