细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
6期
569-571
,共3页
葛彦%陈永井%瞿秋霞%张学光
葛彥%陳永井%瞿鞦霞%張學光
갈언%진영정%구추하%장학광
单克隆抗体%CD154%Fab
單剋隆抗體%CD154%Fab
단극륭항체%CD154%Fab
目的: 通过基因工程技术构建和表达抗人CD154人-鼠嵌合抗体Fab段.方法: 从分泌鼠抗人CD154单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株4F1中提取总RNA, 分别采用特异性引物扩增mAb VH 和VL的DNA编码区基因.同时, 从人脾脏细胞中克隆出免疫球蛋白恒定区基因.利用基因重组技术构建嵌合Fab共表达载体pTXB1-Fab, 利用大肠杆菌表达简单, 高效, 成本低廉的特点, 对重组Fab进行原核表达.利用SDS-PAGE电泳、Western blot、流式细胞术对表达产物进行鉴定.结果: NCBI数据库BLAST显示, 克隆的基因序列符合小鼠Ig可变区特征.表达质粒pTXB1-Fab构建正确, 在大肠杆菌中实现可溶性表达.表达的人-鼠嵌合抗体与亲本抗体具有相同的识别位点. 结论: 成功地克隆获得阻断型抗人CD154 mAb(4F1)的轻链、重链可变区基因, 成功构建pTXB1-Fab共表达载体, 在大肠杆菌中实现可溶性表达, 为人源化抗体的制备奠定了技术基础.
目的: 通過基因工程技術構建和錶達抗人CD154人-鼠嵌閤抗體Fab段.方法: 從分泌鼠抗人CD154單剋隆抗體(mAb)的雜交瘤細胞株4F1中提取總RNA, 分彆採用特異性引物擴增mAb VH 和VL的DNA編碼區基因.同時, 從人脾髒細胞中剋隆齣免疫毬蛋白恆定區基因.利用基因重組技術構建嵌閤Fab共錶達載體pTXB1-Fab, 利用大腸桿菌錶達簡單, 高效, 成本低廉的特點, 對重組Fab進行原覈錶達.利用SDS-PAGE電泳、Western blot、流式細胞術對錶達產物進行鑒定.結果: NCBI數據庫BLAST顯示, 剋隆的基因序列符閤小鼠Ig可變區特徵.錶達質粒pTXB1-Fab構建正確, 在大腸桿菌中實現可溶性錶達.錶達的人-鼠嵌閤抗體與親本抗體具有相同的識彆位點. 結論: 成功地剋隆穫得阻斷型抗人CD154 mAb(4F1)的輕鏈、重鏈可變區基因, 成功構建pTXB1-Fab共錶達載體, 在大腸桿菌中實現可溶性錶達, 為人源化抗體的製備奠定瞭技術基礎.
목적: 통과기인공정기술구건화표체항인CD154인-서감합항체Fab단.방법: 종분비서항인CD154단극륭항체(mAb)적잡교류세포주4F1중제취총RNA, 분별채용특이성인물확증mAb VH 화VL적DNA편마구기인.동시, 종인비장세포중극륭출면역구단백항정구기인.이용기인중조기술구건감합Fab공표체재체pTXB1-Fab, 이용대장간균표체간단, 고효, 성본저렴적특점, 대중조Fab진행원핵표체.이용SDS-PAGE전영、Western blot、류식세포술대표체산물진행감정.결과: NCBI수거고BLAST현시, 극륭적기인서렬부합소서Ig가변구특정.표체질립pTXB1-Fab구건정학, 재대장간균중실현가용성표체.표체적인-서감합항체여친본항체구유상동적식별위점. 결론: 성공지극륭획득조단형항인CD154 mAb(4F1)적경련、중련가변구기인, 성공구건pTXB1-Fab공표체재체, 재대장간균중실현가용성표체, 위인원화항체적제비전정료기술기출.
