中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2008年
6期
412-416
,共5页
唐成武%刘朔婕%马彦彬%梁靓%郭萍%王淑玉%邹镇%高红%段秋红%程继忠%戴五星
唐成武%劉朔婕%馬彥彬%樑靚%郭萍%王淑玉%鄒鎮%高紅%段鞦紅%程繼忠%戴五星
당성무%류삭첩%마언빈%량정%곽평%왕숙옥%추진%고홍%단추홍%정계충%대오성
日本血吸虫%多基因DNA疫苗%免疫保护作用
日本血吸蟲%多基因DNA疫苗%免疫保護作用
일본혈흡충%다기인DNA역묘%면역보호작용
目的 构建H本血吸虫多基因非融合性膜锚定表达疫苗pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,并研究其免疫原性及免疫保护作用.方法 构建日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Si14)、谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26)和副肌球蛋白(Sj97)的跨膜共表达质粒pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,转染HeLa细胞.通过RT-PCR法检测Sj14、Sj26和Sj97 mRNA的表达,免疫荧光(IFA)检测Sj14、Sj26和Sj97蛋白的表达.用纯化的该质粒免疫BALB/c小鼠(100μ/g只),设生理盐水和窄载体对照组,20只/组.每隔2周加强免疫1次,共免疫3次.末次免疫2周后,每组取10只小鼠,眼球取血并断颁处死,取脾淋巴细胞及腹腔巨噬细胞,,分别检测免疫小鼠血清巾总IgG抗体及脾淋巴细胞培养上清干扰素-γ(JFN-γ)水平,淋巴细胞刺激指数(SI)及NO释放量.并分析脾淋巴细胞亚群.各组巾余下小鼠每只经腹部感染40±1条尾蚴,45 d后剖杀,计数成虫数及肝卵数,计算减虫率和减卵率.结果 构建的质粒可在体外表达.疫苗组、牛理盐水组和空白质粒组血清总IgG抗体含量分别为(5.62±0.64)、(1.22±0.20)及(1.48±0.36)mg/ml,疫苗组与各对照组差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05).疫苗组、生理盐水组和空白质粒组小鼠腹腔巨噬细胞NO含量分别为(321.19±18.03)、(184.12±11.05)及(213.51±15.93)nmol/ml.疫苗组与生理盐水组问差异有统计学意义(P<0.05).疫苗组、生理盐水组,空白质粒组小鼠脾淋巴细胞刺激指数分别为(2.25±0.29)、(1.18±0.07)及(1.22±0.09),疫苗组显著升高(P<0.01).疫苗组INF-γ水平与各对照组相比,差异具有统汁学意义(P<0.01);CD4+和CD8+T细胞百分比明显升高.疫苗组减虫率和肝减卵率分别为39.9%和43.94%.结论 pIRES-Sj97-Si14-Sj26疫苗具有较强的免疫原性.可对日本血吸虫感染的小鼠产生一定保护作用.
目的 構建H本血吸蟲多基因非融閤性膜錨定錶達疫苗pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,併研究其免疫原性及免疫保護作用.方法 構建日本血吸蟲脂肪痠結閤蛋白(Si14)、穀胱甘肽-S-轉移酶(Sj26)和副肌毬蛋白(Sj97)的跨膜共錶達質粒pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,轉染HeLa細胞.通過RT-PCR法檢測Sj14、Sj26和Sj97 mRNA的錶達,免疫熒光(IFA)檢測Sj14、Sj26和Sj97蛋白的錶達.用純化的該質粒免疫BALB/c小鼠(100μ/g隻),設生理鹽水和窄載體對照組,20隻/組.每隔2週加彊免疫1次,共免疫3次.末次免疫2週後,每組取10隻小鼠,眼毬取血併斷頒處死,取脾淋巴細胞及腹腔巨噬細胞,,分彆檢測免疫小鼠血清巾總IgG抗體及脾淋巴細胞培養上清榦擾素-γ(JFN-γ)水平,淋巴細胞刺激指數(SI)及NO釋放量.併分析脾淋巴細胞亞群.各組巾餘下小鼠每隻經腹部感染40±1條尾蚴,45 d後剖殺,計數成蟲數及肝卵數,計算減蟲率和減卵率.結果 構建的質粒可在體外錶達.疫苗組、牛理鹽水組和空白質粒組血清總IgG抗體含量分彆為(5.62±0.64)、(1.22±0.20)及(1.48±0.36)mg/ml,疫苗組與各對照組差異均具有統計學意義(P<0.01,P<0.05).疫苗組、生理鹽水組和空白質粒組小鼠腹腔巨噬細胞NO含量分彆為(321.19±18.03)、(184.12±11.05)及(213.51±15.93)nmol/ml.疫苗組與生理鹽水組問差異有統計學意義(P<0.05).疫苗組、生理鹽水組,空白質粒組小鼠脾淋巴細胞刺激指數分彆為(2.25±0.29)、(1.18±0.07)及(1.22±0.09),疫苗組顯著升高(P<0.01).疫苗組INF-γ水平與各對照組相比,差異具有統汁學意義(P<0.01);CD4+和CD8+T細胞百分比明顯升高.疫苗組減蟲率和肝減卵率分彆為39.9%和43.94%.結論 pIRES-Sj97-Si14-Sj26疫苗具有較彊的免疫原性.可對日本血吸蟲感染的小鼠產生一定保護作用.
목적 구건H본혈흡충다기인비융합성막묘정표체역묘pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,병연구기면역원성급면역보호작용.방법 구건일본혈흡충지방산결합단백(Si14)、곡광감태-S-전이매(Sj26)화부기구단백(Sj97)적과막공표체질립pIRES-Sj97-Sj14-Sj26,전염HeLa세포.통과RT-PCR법검측Sj14、Sj26화Sj97 mRNA적표체,면역형광(IFA)검측Sj14、Sj26화Sj97단백적표체.용순화적해질립면역BALB/c소서(100μ/g지),설생리염수화착재체대조조,20지/조.매격2주가강면역1차,공면역3차.말차면역2주후,매조취10지소서,안구취혈병단반처사,취비림파세포급복강거서세포,,분별검측면역소서혈청건총IgG항체급비림파세포배양상청간우소-γ(JFN-γ)수평,림파세포자격지수(SI)급NO석방량.병분석비림파세포아군.각조건여하소서매지경복부감염40±1조미유,45 d후부살,계수성충수급간란수,계산감충솔화감란솔.결과 구건적질립가재체외표체.역묘조、우리염수조화공백질립조혈청총IgG항체함량분별위(5.62±0.64)、(1.22±0.20)급(1.48±0.36)mg/ml,역묘조여각대조조차이균구유통계학의의(P<0.01,P<0.05).역묘조、생리염수조화공백질립조소서복강거서세포NO함량분별위(321.19±18.03)、(184.12±11.05)급(213.51±15.93)nmol/ml.역묘조여생리염수조문차이유통계학의의(P<0.05).역묘조、생리염수조,공백질립조소서비림파세포자격지수분별위(2.25±0.29)、(1.18±0.07)급(1.22±0.09),역묘조현저승고(P<0.01).역묘조INF-γ수평여각대조조상비,차이구유통즙학의의(P<0.01);CD4+화CD8+T세포백분비명현승고.역묘조감충솔화간감란솔분별위39.9%화43.94%.결론 pIRES-Sj97-Si14-Sj26역묘구유교강적면역원성.가대일본혈흡충감염적소서산생일정보호작용.
