CAJ | 학술논문

细胞色素P450酶(P450)的分子改造及其催化的生物转化是当前的两个研究热点.本研究以扩展P450 2A6的底物适应性为目标,通过尝试对P450 2A6酶进行N-端修饰提高表达量、筛选随机突变库以及点突变改变活性位点重要氨基酸残基等手段,在两个随机突变体中未筛选到功能突变体,但通过点突变重要氨基酸残基获得了新的突变体P450 2A6 (N297Q/I300A).该突变体具有比野生型和已报道的其它突变体更广泛的底物适应性,能够催化氧化大位阻底物6-苄氧基吲哚(6-OBzl-indole)生成蓝绿色物质.该物质经质谱测定为靛蓝类二聚体化合物.实验表明,其中两个氨基酸残基的变化都是关键突变,此结果与最新的P450 2A6突变体晶体结构研究相符.计算机模拟显示,I300A突变导致活性口袋在铁卟啉环的垂直和水平方向都增大,使其能接纳在两个方向都有位阻的底物;而297位的天冬酰胺是一个功能保守的残基,N297Q的变化可能与氢键等弱作用有关.图4表1参29
세포색소P450매(P450)적분자개조급기최화적생물전화시당전적량개연구열점.본연구이확전P450 2A6적저물괄응성위목표,통과상시대P450 2A6매진행N-단수식제고표체량、사선수궤돌변고이급점돌변개변활성위점중요안기산잔기등수단,재량개수궤돌변체중미사선도공능돌변체,단통과점돌변중요안기산잔기획득료신적돌변체P450 2A6 (N297Q/I300A).해돌변체구유비야생형화이보도적기타돌변체경엄범적저물괄응성,능구최화양화대위조저물6-변양기신타(6-OBzl-indole)생성람록색물질.해물질경질보측정위전람류이취체화합물.실험표명,기중량개안기산잔기적변화도시관건돌변,차결과여최신적P450 2A6돌변체정체결구연구상부.계산궤모의현시,I300A돌변도치활성구대재철계람배적수직화수평방향도증대,사기능접납재량개방향도유위조적저물;이297위적천동선알시일개공능보수적잔기,N297Q적변화가능여경건등약작용유관.도4표1삼29