中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2011年
1期
2-6
,共5页
巫晔翔%司书毅%蒋建东%唐巍然
巫曄翔%司書毅%蔣建東%唐巍然
무엽상%사서의%장건동%당외연
免疫抑制剂%T淋巴细胞,调节性%转录因子%启动区(遗传学)%遗传载体
免疫抑製劑%T淋巴細胞,調節性%轉錄因子%啟動區(遺傳學)%遺傳載體
면역억제제%T림파세포,조절성%전록인자%계동구(유전학)%유전재체
目的 构建以FOXP3为靶点的免疫抑制剂筛选模型,用于筛选免疫抑制剂.方法 以人类基因组DNA为模板,通过PCR扩增人类FOXP3基因启动子,将扩增的启动子DNA片段克隆至pGeneBLAzer-TOPO载体,以PCR方法确定插入片段方向,选取有正向片段的质粒克隆进行测序鉴定,用Lipofectine2000转染Jurkat细胞株,经G418抗性筛选获得阳性细胞克隆,通过PCR扩增鉴定阳性细胞克隆基因组中整合有FOXP3启动子/pGeneBLAzer-TOPO载体.以阳性对照前列腺素-2(PGE2)和PMA/Ionophore刺激细胞,探讨FOXP3启动子对下游报告子β-内酰胺酶活性的影响,并筛选了研究所内约2500余种天然产物.结果 通过PCR成功扩增人类FOXP3基因启动子全长区域,构建了FOXP3启动子/pGeneBLAzer-TOPO载体,以PCR方法鉴定稳定转染细胞株Jurkat细胞基因组中整合有FOXP3启动了/pGeneBLAzer-TOPO载体,探讨了阳性对照PGE2和PMA/Ionophore对FOXP3基因启动子活性的影响,建立了以FOXP3为靶点的免疫抑制剂药物筛选模型,筛选了研究所2500余种天然产物,获得4个对FOXP3基因启动子具有上调作用的天然产物.结论 建立了以FOXP3为靶点的免疫抑制剂筛选模型.
目的 構建以FOXP3為靶點的免疫抑製劑篩選模型,用于篩選免疫抑製劑.方法 以人類基因組DNA為模闆,通過PCR擴增人類FOXP3基因啟動子,將擴增的啟動子DNA片段剋隆至pGeneBLAzer-TOPO載體,以PCR方法確定插入片段方嚮,選取有正嚮片段的質粒剋隆進行測序鑒定,用Lipofectine2000轉染Jurkat細胞株,經G418抗性篩選穫得暘性細胞剋隆,通過PCR擴增鑒定暘性細胞剋隆基因組中整閤有FOXP3啟動子/pGeneBLAzer-TOPO載體.以暘性對照前列腺素-2(PGE2)和PMA/Ionophore刺激細胞,探討FOXP3啟動子對下遊報告子β-內酰胺酶活性的影響,併篩選瞭研究所內約2500餘種天然產物.結果 通過PCR成功擴增人類FOXP3基因啟動子全長區域,構建瞭FOXP3啟動子/pGeneBLAzer-TOPO載體,以PCR方法鑒定穩定轉染細胞株Jurkat細胞基因組中整閤有FOXP3啟動瞭/pGeneBLAzer-TOPO載體,探討瞭暘性對照PGE2和PMA/Ionophore對FOXP3基因啟動子活性的影響,建立瞭以FOXP3為靶點的免疫抑製劑藥物篩選模型,篩選瞭研究所2500餘種天然產物,穫得4箇對FOXP3基因啟動子具有上調作用的天然產物.結論 建立瞭以FOXP3為靶點的免疫抑製劑篩選模型.
목적 구건이FOXP3위파점적면역억제제사선모형,용우사선면역억제제.방법 이인류기인조DNA위모판,통과PCR확증인류FOXP3기인계동자,장확증적계동자DNA편단극륭지pGeneBLAzer-TOPO재체,이PCR방법학정삽입편단방향,선취유정향편단적질립극륭진행측서감정,용Lipofectine2000전염Jurkat세포주,경G418항성사선획득양성세포극륭,통과PCR확증감정양성세포극륭기인조중정합유FOXP3계동자/pGeneBLAzer-TOPO재체.이양성대조전렬선소-2(PGE2)화PMA/Ionophore자격세포,탐토FOXP3계동자대하유보고자β-내선알매활성적영향,병사선료연구소내약2500여충천연산물.결과 통과PCR성공확증인류FOXP3기인계동자전장구역,구건료FOXP3계동자/pGeneBLAzer-TOPO재체,이PCR방법감정은정전염세포주Jurkat세포기인조중정합유FOXP3계동료/pGeneBLAzer-TOPO재체,탐토료양성대조PGE2화PMA/Ionophore대FOXP3기인계동자활성적영향,건립료이FOXP3위파점적면역억제제약물사선모형,사선료연구소2500여충천연산물,획득4개대FOXP3기인계동자구유상조작용적천연산물.결론 건립료이FOXP3위파점적면역억제제사선모형.
