基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2011年
4期
377-382
,共6页
杨兵%陈维贤%文阳安%黄世峰%周倩云%张莉萍
楊兵%陳維賢%文暘安%黃世峰%週倩雲%張莉萍
양병%진유현%문양안%황세봉%주천운%장리평
乙型肝炎病毒X蛋白%肝癌%小分子干扰RNA%稳定表达
乙型肝炎病毒X蛋白%肝癌%小分子榦擾RNA%穩定錶達
을형간염병독X단백%간암%소분자간우RNA%은정표체
目的 构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)基因的HepG2-HBX细胞系,观察小分子干扰RNA(siRNA)对HBX基因的特异性抑制效果.方法 用脂质体将含有HBX序列的真核表达质粒pCDNA3.1(+)/HBX-Flag转染人HepG2细胞系,通过G418筛选后,分别经RT-PCR和免疫组化对HBX的表达进行验证;化学合成靶向HBX的siRNA(即siHBX),转染入HBX稳定表达株,分别以RT-PCB和实时荧光定量RT-PCR检测HBX mRNA表达水平,Western blot检测HBX蛋白表达水平以验证siHBX对HBX基因的沉默效应,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 成功构建表达HBX基因的HepG2-HBX细胞系;siHBX可以高效特异抑制HBX表达,并抑制细胞周期进展.结论 siHBX可作为一种靶向抑制肝癌细胞系内HBX表达的策略,为后续HBV感染相关性肝癌的治疗奠定了实验基础.
目的 構建穩定錶達乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)基因的HepG2-HBX細胞繫,觀察小分子榦擾RNA(siRNA)對HBX基因的特異性抑製效果.方法 用脂質體將含有HBX序列的真覈錶達質粒pCDNA3.1(+)/HBX-Flag轉染人HepG2細胞繫,通過G418篩選後,分彆經RT-PCR和免疫組化對HBX的錶達進行驗證;化學閤成靶嚮HBX的siRNA(即siHBX),轉染入HBX穩定錶達株,分彆以RT-PCB和實時熒光定量RT-PCR檢測HBX mRNA錶達水平,Western blot檢測HBX蛋白錶達水平以驗證siHBX對HBX基因的沉默效應,流式細胞儀檢測細胞週期變化.結果 成功構建錶達HBX基因的HepG2-HBX細胞繫;siHBX可以高效特異抑製HBX錶達,併抑製細胞週期進展.結論 siHBX可作為一種靶嚮抑製肝癌細胞繫內HBX錶達的策略,為後續HBV感染相關性肝癌的治療奠定瞭實驗基礎.
목적 구건은정표체을형간염병독X단백(HBX)기인적HepG2-HBX세포계,관찰소분자간우RNA(siRNA)대HBX기인적특이성억제효과.방법 용지질체장함유HBX서렬적진핵표체질립pCDNA3.1(+)/HBX-Flag전염인HepG2세포계,통과G418사선후,분별경RT-PCR화면역조화대HBX적표체진행험증;화학합성파향HBX적siRNA(즉siHBX),전염입HBX은정표체주,분별이RT-PCB화실시형광정량RT-PCR검측HBX mRNA표체수평,Western blot검측HBX단백표체수평이험증siHBX대HBX기인적침묵효응,류식세포의검측세포주기변화.결과 성공구건표체HBX기인적HepG2-HBX세포계;siHBX가이고효특이억제HBX표체,병억제세포주기진전.결론 siHBX가작위일충파향억제간암세포계내HBX표체적책략,위후속HBV감염상관성간암적치료전정료실험기출.
