CAJ | 학술논문

建立检测牛Toll样受体(TLRs)mRNA表达水平的SYBR GreenI实时荧光定量PCR方法.根据GenBank中BoTLR-2、3、4、5、7、8和10的基因序列,在其保守区设计并合成各自特异性引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶基因(GAPDH)为内参,建立实时荧光定量PCR方法.结果表明,在1×102～1×109 copies/μL范围内,BoTLRs和GAPDH基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991.溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的灵敏度和特异性.重复性结果表明,TLRs和GAPDH基因阳性质粒,最小检出浓度达到100和10 copies/μL,组内、组间变异系数值均保持在3.5%以内.临床样品检测结果表明,TLR3和TLR8 mRNA水平在诱导培养早期较高,在4 h达到高峰,而TLR4和TLR7水平与之相反,在诱导培养后期较高,在24 h达到高峰,表明本研究所建立的检测方法成功用于临床样品的检测,为在mRNA水平对BoTLRs的定量分析提供技术平台.
건립검측우Toll양수체(TLRs)mRNA표체수평적SYBR GreenI실시형광정량PCR방법.근거GenBank중BoTLR-2、3、4、5、7、8화10적기인서렬,재기보수구설계병합성각자특이성인물,이우3-린산감유탈경매기인(GAPDH)위내삼,건립실시형광정량PCR방법.결과표명,재1×102～1×109 copies/μL범위내,BoTLRs화GAPDH기인적Ct치여양성질립적농도균정량호적선성관계,상관계수균대우0.991.용해곡선분석표명,산물위특이적단봉,구유교고적령민도화특이성.중복성결과표명,TLRs화GAPDH기인양성질립,최소검출농도체도100화10 copies/μL,조내、조간변이계수치균보지재3.5%이내.림상양품검측결과표명,TLR3화TLR8 mRNA수평재유도배양조기교고,재4 h체도고봉,이TLR4화TLR7수평여지상반,재유도배양후기교고,재24 h체도고봉,표명본연구소건립적검측방법성공용우림상양품적검측,위재mRNA수평대BoTLRs적정량분석제공기술평태.