现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2012年
2期
234-238
,共5页
李庆昌%戴顺东%王鑫%潘泳岐%徐洪涛%王恩华
李慶昌%戴順東%王鑫%潘泳岐%徐洪濤%王恩華
리경창%대순동%왕흠%반영기%서홍도%왕은화
p120ctn%核内定位载体pCMV/myc/nuc%重组质粒
p120ctn%覈內定位載體pCMV/myc/nuc%重組質粒
p120ctn%핵내정위재체pCMV/myc/nuc%중조질립
目的 既往少数研究表明p120ctn存在核浆穿梭现象,为研究细胞核内p120ctn的功能,我们试图构建p120ctn 3A细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 3A.方法 采用PCR方法扩增人p120ctn 3A活性片段,将其插入细胞核定向表达载体pCMV/myc/nuc,构建重组体pCMV/p120ctn 3A,经脂质体介导转染肺癌细胞A549,用荧光显微镜观察绿色荧光信号,免疫细胞化学及Western blot鉴定其在肺癌细胞A549中的表达与定位.结果 限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入pCMV/p120ctn 3A的片段为2496bp左右,与预期p120ctn 3A基因片段大小相同.荧光显微镜观察到绿色荧光信号定位于细胞核内,免疫细胞化学结果显示表达的p120ctn 3A定位于A549细胞核.Western blot结果显示转染pCMV/p120ctn 3A的A549细胞p120ctn 3A蛋白表达量显著上调.结论 成功构建了p120ctn 3A 细胞核定向表达载体pCMV/p120ctn 3A.
目的 既往少數研究錶明p120ctn存在覈漿穿梭現象,為研究細胞覈內p120ctn的功能,我們試圖構建p120ctn 3A細胞覈定嚮錶達載體pCMV/p120ctn 3A.方法 採用PCR方法擴增人p120ctn 3A活性片段,將其插入細胞覈定嚮錶達載體pCMV/myc/nuc,構建重組體pCMV/p120ctn 3A,經脂質體介導轉染肺癌細胞A549,用熒光顯微鏡觀察綠色熒光信號,免疫細胞化學及Western blot鑒定其在肺癌細胞A549中的錶達與定位.結果 限製性雙酶切及DNA測序分析結果顯示插入pCMV/p120ctn 3A的片段為2496bp左右,與預期p120ctn 3A基因片段大小相同.熒光顯微鏡觀察到綠色熒光信號定位于細胞覈內,免疫細胞化學結果顯示錶達的p120ctn 3A定位于A549細胞覈.Western blot結果顯示轉染pCMV/p120ctn 3A的A549細胞p120ctn 3A蛋白錶達量顯著上調.結論 成功構建瞭p120ctn 3A 細胞覈定嚮錶達載體pCMV/p120ctn 3A.
목적 기왕소수연구표명p120ctn존재핵장천사현상,위연구세포핵내p120ctn적공능,아문시도구건p120ctn 3A세포핵정향표체재체pCMV/p120ctn 3A.방법 채용PCR방법확증인p120ctn 3A활성편단,장기삽입세포핵정향표체재체pCMV/myc/nuc,구건중조체pCMV/p120ctn 3A,경지질체개도전염폐암세포A549,용형광현미경관찰록색형광신호,면역세포화학급Western blot감정기재폐암세포A549중적표체여정위.결과 한제성쌍매절급DNA측서분석결과현시삽입pCMV/p120ctn 3A적편단위2496bp좌우,여예기p120ctn 3A기인편단대소상동.형광현미경관찰도록색형광신호정위우세포핵내,면역세포화학결과현시표체적p120ctn 3A정위우A549세포핵.Western blot결과현시전염pCMV/p120ctn 3A적A549세포p120ctn 3A단백표체량현저상조.결론 성공구건료p120ctn 3A 세포핵정향표체재체pCMV/p120ctn 3A.
