基质金属蛋白酶抑制剂-1基因的RNA干扰载体构建及其抑制效应
기질금속단백매억제제-1기인적RNA간우재체구건급기억제효응
Construction of the RNA interference vector of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 gene and its inhibitory effects
  • 万方数据
    临床肝胆病杂志 림상간담병잡지
    CHINESE JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
    2012年 2期 135-138 ,共4页

    张素梅%谢玉梅%郝春秋%康文臻%张颖%姜娜%马力%彭梅娟%贾战生

    장소매%사옥매%학춘추%강문진%장영%강나%마력%팽매연%가전생

    金属蛋白酶组织抑制剂%RNA干扰%肝硬化 金屬蛋白酶組織抑製劑%RNA榦擾%肝硬化
    금속단백매조직억제제%RNA간우%간경화
    目的 构建含有基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)基因特异性RNA干扰序列的慢病毒vshRNA载体,筛选有效靶点序列.方法 通过在线软件设计TIMP-1基因的RNA干扰(RNAi)序列,按siRNA设计的优化原则筛选靶序列,构建含有TIMP-1基因特异性慢病毒vshRNA载体.将重组pEGFP-N1-3FLAG-TIMP-1质粒和慢病毒质粒pGCSIL-GFP-shRNA共转染293T细胞,转染48 h后收集细胞,抽提总蛋白进行Western Blot检测,筛选抑制效应较好的质粒.结果 依次通过在线软件设计序列、优化筛选、BLAST比对等方法,选择4条作为靶序列,又经Western Blot检测筛选出抑制效应较好的1条序列,其在TIMP-1基因的173～192 nt处.结论 成功构建了具有抑制效应的TIMP-1基因特异性RNA干扰序列的慢病毒vshRNA载体,筛选出抑制TIMP-1表达的序列,为抗肝纤维化研究奠定了基础.
    목적 구건함유기질금속단백매억제제-1(TIMP-1)기인특이성RNA간우서렬적만병독vshRNA재체,사선유효파점서렬.방법 통과재선연건설계TIMP-1기인적RNA간우(RNAi)서렬,안siRNA설계적우화원칙사선파서렬,구건함유TIMP-1기인특이성만병독vshRNA재체.장중조pEGFP-N1-3FLAG-TIMP-1질립화만병독질립pGCSIL-GFP-shRNA공전염293T세포,전염48 h후수집세포,추제총단백진행Western Blot검측,사선억제효응교호적질립.결과 의차통과재선연건설계서렬、우화사선、BLAST비대등방법,선택4조작위파서렬,우경Western Blot검측사선출억제효응교호적1조서렬,기재TIMP-1기인적173～192 nt처.결론 성공구건료구유억제효응적TIMP-1기인특이성RNA간우서렬적만병독vshRNA재체,사선출억제TIMP-1표체적서렬,위항간섬유화연구전정료기출.
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