西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2012年
1期
29-34,47
,共7页
邱文%李妍%周建博%赵聃%王迎伟
邱文%李妍%週建博%趙聃%王迎偉
구문%리연%주건박%조담%왕영위
肾小球系膜细胞%亚溶解型C5b-9复合物%血小板反应蛋白-1%细胞外基质%小发夹RNA
腎小毬繫膜細胞%亞溶解型C5b-9複閤物%血小闆反應蛋白-1%細胞外基質%小髮夾RNA
신소구계막세포%아용해형C5b-9복합물%혈소판반응단백-1%세포외기질%소발협RNA
目的 研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic) C5 b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响.方法 设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,筛选沉默效率最佳的TSP 1 shRNA(shTSP-1)后,将shTSP 1转染体外培养的大鼠GMC,再给予sublytic C5b-9刺激.以Westernblot检查TSP-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的表达情况.另用ELISA法测定培养上清中总转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量.结果 核酸序列分析证明,4种TSP-1 shRNA重组质粒均构建成功.Western blot实验证实,构建的shTSP- 1-3 (Thbs1-3)具有最佳的沉默效率.将shTSP-1-3转染大鼠GMC后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b 9诱导的TGF-β1活化及细胞外基质(FN和collagenⅣ)的合成.结论 TSP-1基因表达在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导TGF-β1活化及ECM分泌的过程中,发挥了重要的促进作用.
目的 研究沉默血小闆反應蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因對于亞溶解型(sublytic) C5 b-9複閤物誘導大鼠腎小毬繫膜細胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌細胞外基質(extracellular matrix,ECM)的影響.方法 設計閤成針對TSP-1基因4箇靶點的小髮夾RNA(small hair RNA,shRNA),併構建相應的錶達質粒,篩選沉默效率最佳的TSP 1 shRNA(shTSP-1)後,將shTSP 1轉染體外培養的大鼠GMC,再給予sublytic C5b-9刺激.以Westernblot檢查TSP-1、纖維連接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型膠原蛋白(collagenⅣ)的錶達情況.另用ELISA法測定培養上清中總轉化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量.結果 覈痠序列分析證明,4種TSP-1 shRNA重組質粒均構建成功.Western blot實驗證實,構建的shTSP- 1-3 (Thbs1-3)具有最佳的沉默效率.將shTSP-1-3轉染大鼠GMC後,在沉默TSP-1基因錶達的同時,能明顯抑製由sublytic C5b 9誘導的TGF-β1活化及細胞外基質(FN和collagenⅣ)的閤成.結論 TSP-1基因錶達在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC誘導TGF-β1活化及ECM分泌的過程中,髮揮瞭重要的促進作用.
목적 연구침묵혈소판반응단백-1(thrombospondin-1,TSP-1)기인대우아용해형(sublytic) C5 b-9복합물유도대서신소구계막세포(glomerular mesangial cell,GMC)분비세포외기질(extracellular matrix,ECM)적영향.방법 설계합성침대TSP-1기인4개파점적소발협RNA(small hair RNA,shRNA),병구건상응적표체질립,사선침묵효솔최가적TSP 1 shRNA(shTSP-1)후,장shTSP 1전염체외배양적대서GMC,재급여sublytic C5b-9자격.이Westernblot검사TSP-1、섬유련접단백(fibronectin,FN)급Ⅳ형효원단백(collagenⅣ)적표체정황.령용ELISA법측정배양상청중총전화생장인자-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)화활화TGF-β1적함량.결과 핵산서렬분석증명,4충TSP-1 shRNA중조질립균구건성공.Western blot실험증실,구건적shTSP- 1-3 (Thbs1-3)구유최가적침묵효솔.장shTSP-1-3전염대서GMC후,재침묵TSP-1기인표체적동시,능명현억제유sublytic C5b 9유도적TGF-β1활화급세포외기질(FN화collagenⅣ)적합성.결론 TSP-1기인표체재sublytic C5b-9자격대서GMC유도TGF-β1활화급ECM분비적과정중,발휘료중요적촉진작용.
