弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗的研制
궁형충pc-DNA3-ROP2핵산역묘적연제
Studies of pc-DNA3-ROP2 nucleic acid vaccine of Toxoplasma gondii
  • 万方数据
    中国病原生物学杂志 중국병원생물학잡지
    JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
    2008年 5期 374-378 ,共5页

    李瑾%魏庆宽%徐秀来%傅婷霞%崔勇%肖婷%王洪法%张佃波%王用斌%黄炳成%闫歌%韩广东

    리근%위경관%서수래%부정하%최용%초정%왕홍법%장전파%왕용빈%황병성%염가%한엄동

    刚地弓形虫%棒状体蛋白2(ROP2)%基因重组%核酸疫苗%免疫保护作用 剛地弓形蟲%棒狀體蛋白2(ROP2)%基因重組%覈痠疫苗%免疫保護作用
    강지궁형충%봉상체단백2(ROP2)%기인중조%핵산역묘%면역보호작용
    目的 研究廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治.方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2基因片段,克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备抗弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗.应用该疫苗免疫小鼠,通过ELISA检测血清抗体,Western blot鉴定该疫苗的免疫原性;应用RH株弓形虫进行动物攻击实验,评价其安全性及免疫保护性. 结果 以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7 kb ROP2基因片段,克隆于pc-DNA3质粒中,成功构建了pc-DNA3-ROP2重组质粒.测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白.应用该疫苗免疫小鼠,能诱导产生强烈的细胞、体液免疫反应,使实验组小鼠攻虫感染后的存活时间明显延长,攻虫感染192 h后的存活率为77.8%,空质粒及PBS对照组存活率为0,差异有统计学意义(P＜0.001);实验全程免疫小鼠未发生毒性及异常反应. 结论 该核酸疫苗具有很强的免疫原性,安全可靠,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用,具有很好的开发应用价值.
    목적 연구렴개유효적항궁형충핵산역묘,이용우인류화축류궁형충병적방치.방법 수집、순화RH주궁형충속식자,제취기인조DNA;근거ROP2기인서렬,설계합성ROP2기인인물,응용PCR、매절、련접、측서등기술,확증ROP2기인편단,극륭우진핵표체재체pc-DNA3질립중,제비항궁형충pc-DNA3-ROP2핵산역묘.응용해역묘면역소서,통과ELISA검측혈청항체,Western blot감정해역묘적면역원성;응용RH주궁형충진행동물공격실험,평개기안전성급면역보호성. 결과 이궁형충기인조DNA위모판,PCR확증출1.7 kb ROP2기인편단,극륭우pc-DNA3질립중,성공구건료pc-DNA3-ROP2중조질립.측서결과현시,중조질립포함료ROP2단백기인독마광내적완정서렬,능완정표체ROP2적항원단백.응용해역묘면역소서,능유도산생강렬적세포、체액면역반응,사실험조소서공충감염후적존활시간명현연장,공충감염192 h후적존활솔위77.8%,공질립급PBS대조조존활솔위0,차이유통계학의의(P＜0.001);실험전정면역소서미발생독성급이상반응. 결론 해핵산역묘구유흔강적면역원성,안전가고,능유도소서산생량호적면역보호작용,구유흔호적개발응용개치.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문