实用肝脏病杂志
實用肝髒病雜誌
실용간장병잡지
JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
2003年
1期
7-10
,共4页
李谨革%贾建新%周永兴%连建奇%贾战生%冯志华%郝从容
李謹革%賈建新%週永興%連建奇%賈戰生%馮誌華%郝從容
리근혁%가건신%주영흥%련건기%가전생%풍지화%학종용
核酶%基因治疗%乙型肝炎病毒
覈酶%基因治療%乙型肝炎病毒
핵매%기인치료%을형간염병독
目的观察针对HBV(乙型肝炎病毒)C区双位点核酶在细胞内阻断C区基因表达的作用.方法采用亚克隆技术,从pGEM-Rz123(含针对HBV C区双位点核酶)上切下双位点核酶的片段,定向克隆于腺病毒表达载体pAd-CMV中.利用Lipofectamine2000介导,将重组病毒pAdCMV-Rz及pAdCMV-laz感染2.2.15细胞中,采用打点杂交技术观察核酶的表达,采用ELISA(酶联免疫)、免疫荧光、共聚焦定量、图象分析法、Western blot分析Hbe/HBcAg的表达.结果感染的2.2.15细胞2周后,打点杂交证实可表达针对HBV C区双位点核酶.ELISA方法检测发现核酶抑制HBeAg表达68.6%,用免疫荧光、免疫组化、图象分析法、Western blot分析证实核酶可抑制HBV细胞内表达.结论该双位点核酶通过针对HBV C区基因的剪切作用,阻断C区基因表达,抑制了HBe/HBcAg的表达.
目的觀察針對HBV(乙型肝炎病毒)C區雙位點覈酶在細胞內阻斷C區基因錶達的作用.方法採用亞剋隆技術,從pGEM-Rz123(含針對HBV C區雙位點覈酶)上切下雙位點覈酶的片段,定嚮剋隆于腺病毒錶達載體pAd-CMV中.利用Lipofectamine2000介導,將重組病毒pAdCMV-Rz及pAdCMV-laz感染2.2.15細胞中,採用打點雜交技術觀察覈酶的錶達,採用ELISA(酶聯免疫)、免疫熒光、共聚焦定量、圖象分析法、Western blot分析Hbe/HBcAg的錶達.結果感染的2.2.15細胞2週後,打點雜交證實可錶達針對HBV C區雙位點覈酶.ELISA方法檢測髮現覈酶抑製HBeAg錶達68.6%,用免疫熒光、免疫組化、圖象分析法、Western blot分析證實覈酶可抑製HBV細胞內錶達.結論該雙位點覈酶通過針對HBV C區基因的剪切作用,阻斷C區基因錶達,抑製瞭HBe/HBcAg的錶達.
목적관찰침대HBV(을형간염병독)C구쌍위점핵매재세포내조단C구기인표체적작용.방법채용아극륭기술,종pGEM-Rz123(함침대HBV C구쌍위점핵매)상절하쌍위점핵매적편단,정향극륭우선병독표체재체pAd-CMV중.이용Lipofectamine2000개도,장중조병독pAdCMV-Rz급pAdCMV-laz감염2.2.15세포중,채용타점잡교기술관찰핵매적표체,채용ELISA(매련면역)、면역형광、공취초정량、도상분석법、Western blot분석Hbe/HBcAg적표체.결과감염적2.2.15세포2주후,타점잡교증실가표체침대HBV C구쌍위점핵매.ELISA방법검측발현핵매억제HBeAg표체68.6%,용면역형광、면역조화、도상분석법、Western blot분석증실핵매가억제HBV세포내표체.결론해쌍위점핵매통과침대HBV C구기인적전절작용,조단C구기인표체,억제료HBe/HBcAg적표체.
