CAJ | 학술논문

龙胆酸1,2-加双氧酶(GDO)是芳香烃龙胆酸途径的一个关键酶.产碱假单胞菌P25X具有保守性与诱导性各一组GDO同工酶,突变株SNZ28的保守型龙胆酸1,2加双氧酶基因(GDO Ⅰ)被链霉素/奇霉素抗性基因打断,但在含有龙胆酸盐的基本培养基上,仍能明显观察到GDO的活性.由龙胆酸诱导生长的SNZ28全蛋白二维电泳结果分析,获得了一个与Ralstonia sp.U2的GDO酶有极高同源性的蛋白点.根据对该蛋白点的N端和Q-Tof测序的结果, 设计了一对简并引物,克隆了诱导型GDO酶的片段,通过对此片段的分析,设计了逆向PCR引物,利用Southern blot杂交, 确定了合适的限制性内切酶(Sal Ⅰ和Sph Ⅰ),以单一酶切的P25X基因组DNA自联后的产物为模板, 进行反向PCR.测序表明,获得了一段1 047 bp与Ralstonia sp.U2.的龙胆酸1,2-加双氧酶具有极高同源性的序列.研究结果揭示了SNZ28中存在诱导型GDO酶.本文中也对不同来源的GDO酶进行了比较研究,其结果为进一步对生物降解基因的进化研究打下了基础.图4 表2 参16
룡담산1,2-가쌍양매(GDO)시방향경룡담산도경적일개관건매.산감가단포균P25X구유보수성여유도성각일조GDO동공매,돌변주SNZ28적보수형룡담산1,2가쌍양매기인(GDO Ⅰ)피련매소/기매소항성기인타단,단재함유룡담산염적기본배양기상,잉능명현관찰도GDO적활성.유룡담산유도생장적SNZ28전단백이유전영결과분석,획득료일개여Ralstonia sp.U2적GDO매유겁고동원성적단백점.근거대해단백점적N단화Q-Tof측서적결과, 설계료일대간병인물,극륭료유도형GDO매적편단,통과대차편단적분석,설계료역향PCR인물,이용Southern blot잡교, 학정료합괄적한제성내절매(Sal Ⅰ화Sph Ⅰ),이단일매절적P25X기인조DNA자련후적산물위모판, 진행반향PCR.측서표명,획득료일단1 047 bp여Ralstonia sp.U2.적룡담산1,2-가쌍양매구유겁고동원성적서렬.연구결과게시료SNZ28중존재유도형GDO매.본문중야대불동래원적GDO매진행료비교연구,기결과위진일보대생물강해기인적진화연구타하료기출.도4 표2 삼16