化工进展
化工進展
화공진전
CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS
2008年
2期
284-288,293
,共6页
彭益强%罗菊香%张磊%方柏山
彭益彊%囉菊香%張磊%方柏山
팽익강%라국향%장뢰%방백산
1,3-丙二醇脱氢酶%纯化%杂化凝胶%固定化
1,3-丙二醇脫氫酶%純化%雜化凝膠%固定化
1,3-병이순탈경매%순화%잡화응효%고정화
转录表达来源于Klebsiella.pl,3-丙二醇脱氢酶(PDH)基因片段的E.coli工程菌,在5L发酵罐、30℃、pH值7.0、200r/min(微氧)条件下培养20h;发酵菌体经破碎分离后所得样品通过HisTrap HP柱亲和层析一步纯化得到电泳纯的PDH,纯化倍数为2.94倍,活性回收率为50%,经SDS-PAGE电泳鉴定获得一条清晰条带,表达蛋白亚基相对分子质量约为41kDa.用改进的溶胶-凝胶法(杂化凝胶)包埋纯化酶,考察正硅酸乙酯(TEOS)浓度、海藻酸盐(ALG)浓度、CaCl2浓度及ALG与TEOS体积比等因素对酶固定化效果的影响,结果表明,较优包埋条件为:p(TEOS)=20g/L,p(ALG)=30g/L,p(CaCl2)=40g/L,V(ALG):V(TEOS)=3:1;由此制备的PDH的ALG-SiO2杂化凝胶保藏60天后酶活仍保持80%,进行批次反应时,反应3批后酶活保持7013%,反应第6批时酶活剩余29.8%.
轉錄錶達來源于Klebsiella.pl,3-丙二醇脫氫酶(PDH)基因片段的E.coli工程菌,在5L髮酵罐、30℃、pH值7.0、200r/min(微氧)條件下培養20h;髮酵菌體經破碎分離後所得樣品通過HisTrap HP柱親和層析一步純化得到電泳純的PDH,純化倍數為2.94倍,活性迴收率為50%,經SDS-PAGE電泳鑒定穫得一條清晰條帶,錶達蛋白亞基相對分子質量約為41kDa.用改進的溶膠-凝膠法(雜化凝膠)包埋純化酶,攷察正硅痠乙酯(TEOS)濃度、海藻痠鹽(ALG)濃度、CaCl2濃度及ALG與TEOS體積比等因素對酶固定化效果的影響,結果錶明,較優包埋條件為:p(TEOS)=20g/L,p(ALG)=30g/L,p(CaCl2)=40g/L,V(ALG):V(TEOS)=3:1;由此製備的PDH的ALG-SiO2雜化凝膠保藏60天後酶活仍保持80%,進行批次反應時,反應3批後酶活保持7013%,反應第6批時酶活剩餘29.8%.
전록표체래원우Klebsiella.pl,3-병이순탈경매(PDH)기인편단적E.coli공정균,재5L발효관、30℃、pH치7.0、200r/min(미양)조건하배양20h;발효균체경파쇄분리후소득양품통과HisTrap HP주친화층석일보순화득도전영순적PDH,순화배수위2.94배,활성회수솔위50%,경SDS-PAGE전영감정획득일조청석조대,표체단백아기상대분자질량약위41kDa.용개진적용효-응효법(잡화응효)포매순화매,고찰정규산을지(TEOS)농도、해조산염(ALG)농도、CaCl2농도급ALG여TEOS체적비등인소대매고정화효과적영향,결과표명,교우포매조건위:p(TEOS)=20g/L,p(ALG)=30g/L,p(CaCl2)=40g/L,V(ALG):V(TEOS)=3:1;유차제비적PDH적ALG-SiO2잡화응효보장60천후매활잉보지80%,진행비차반응시,반응3비후매활보지7013%,반응제6비시매활잉여29.8%.
