中国普外基础与临床杂志
中國普外基礎與臨床雜誌
중국보외기출여림상잡지
CHINESE JOURNAL OF BASES AND CLINICS IN GENERAL SURGERY
2009年
12期
987-990
,共4页
曹永宽%莫永炎%刘志峰%薛刚%王培红%姜勇%田伏洲
曹永寬%莫永炎%劉誌峰%薛剛%王培紅%薑勇%田伏洲
조영관%막영염%류지봉%설강%왕배홍%강용%전복주
AWP1%重组腺病毒%ECV304细胞%载体构建%细胞信号转导
AWP1%重組腺病毒%ECV304細胞%載體構建%細胞信號轉導
AWP1%중조선병독%ECV304세포%재체구건%세포신호전도
目的 构建人flag-AWP1(associated with protein kinase C related kinase 1)基因的重组腺病毒载体作为AWP1的转基因工具,研究AWP1在人血管内皮细胞ECV304中的表达与定位.方法 将flag-AWP1基因亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确后PmeⅠ线性化,转化至带有骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183中进行重组;经PacⅠ酶切鉴定和 PCR鉴定、线性化后,用Lipofectamine转染293细胞进行包装、反复感染以获取高滴度重组病毒上清.再用获得的重组腺病毒Ad-flag-AWP1感染ECV304细胞,激光扫描共焦显微镜下观察AWP1在ECV304细胞中的表达与定位.结果 包装病毒颗粒的PCR分析显示,成功获得了重组腺病毒Ad-flag-AWP1,该重组腺病毒能够高效感染ECV304细胞,并在激光扫描共焦显微镜下观察到AWP1在细胞内成功表达,且定位于细胞膜内侧.结论 成功构建了flag-AWP1的重组腺病毒基因转染载体,AWP1在ECV304细胞中的表达与定位提示AWP1可能具有细胞信号转导因子的潜能,尚需进一步研究.
目的 構建人flag-AWP1(associated with protein kinase C related kinase 1)基因的重組腺病毒載體作為AWP1的轉基因工具,研究AWP1在人血管內皮細胞ECV304中的錶達與定位.方法 將flag-AWP1基因亞剋隆到腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV,經酶切鑒定正確後PmeⅠ線性化,轉化至帶有骨架質粒pAdEasy-1的大腸桿菌BJ5183中進行重組;經PacⅠ酶切鑒定和 PCR鑒定、線性化後,用Lipofectamine轉染293細胞進行包裝、反複感染以穫取高滴度重組病毒上清.再用穫得的重組腺病毒Ad-flag-AWP1感染ECV304細胞,激光掃描共焦顯微鏡下觀察AWP1在ECV304細胞中的錶達與定位.結果 包裝病毒顆粒的PCR分析顯示,成功穫得瞭重組腺病毒Ad-flag-AWP1,該重組腺病毒能夠高效感染ECV304細胞,併在激光掃描共焦顯微鏡下觀察到AWP1在細胞內成功錶達,且定位于細胞膜內側.結論 成功構建瞭flag-AWP1的重組腺病毒基因轉染載體,AWP1在ECV304細胞中的錶達與定位提示AWP1可能具有細胞信號轉導因子的潛能,尚需進一步研究.
목적 구건인flag-AWP1(associated with protein kinase C related kinase 1)기인적중조선병독재체작위AWP1적전기인공구,연구AWP1재인혈관내피세포ECV304중적표체여정위.방법 장flag-AWP1기인아극륭도선병독천사재체pAdTrack-CMV,경매절감정정학후PmeⅠ선성화,전화지대유골가질립pAdEasy-1적대장간균BJ5183중진행중조;경PacⅠ매절감정화 PCR감정、선성화후,용Lipofectamine전염293세포진행포장、반복감염이획취고적도중조병독상청.재용획득적중조선병독Ad-flag-AWP1감염ECV304세포,격광소묘공초현미경하관찰AWP1재ECV304세포중적표체여정위.결과 포장병독과립적PCR분석현시,성공획득료중조선병독Ad-flag-AWP1,해중조선병독능구고효감염ECV304세포,병재격광소묘공초현미경하관찰도AWP1재세포내성공표체,차정위우세포막내측.결론 성공구건료flag-AWP1적중조선병독기인전염재체,AWP1재ECV304세포중적표체여정위제시AWP1가능구유세포신호전도인자적잠능,상수진일보연구.
