CAJ | 학술논문

背景:慢病毒载体是一个能够在原代培养的人树突状细胞中进行RNA干扰的有效工具,但目前国内对RNA干扰技术应用于人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子的研究却少有报道.目的:拟构建人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素基因RNA干扰慢病毒载体,为调控人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素表达水平提供有利的工具.方法:根据人树突状细胞特异性细胞问黏附分子3结合非整合素基因的mRNA序列选择4条靶序列,设计合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经Age I和EeoR I双酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生DC-SIGN慢病毒载体,采用PCR及测序鉴定,应用Westem blot技术外源性筛选干扰效率高的有效靶序列.用慢病毒包装系统pGCSIL-GFP、pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以系列稀释法测定病毒滴度.结果与结论:PCR扩增和测序结果显示,人树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素核苷酸链序列插入正确,外源性筛选确定两条干扰效率高的有效靶序列.利用筛选确定的有效靶序列,包装产生慢病毒,其浓缩病毒悬液的滴度为1×109TU/mL.证实实验成功构建了DC-SIGN基因慢病毒载体.
배경:만병독재체시일개능구재원대배양적인수돌상세포중진행RNA간우적유효공구,단목전국내대RNA간우기술응용우인수돌상세포특이성세포간점부분자-3-결합비정합소분자적연구각소유보도.목적:의구건인수돌상세포특이성세포간점부분자-3-결합비정합소기인RNA간우만병독재체,위조공인수돌상세포특이성세포간점부분자-3-결합비정합소표체수평제공유리적공구.방법:근거인수돌상세포특이성세포문점부분자3결합비정합소기인적mRNA서렬선택4조파서렬,설계합성파서렬적Oligo DNA,퇴화형성쌍련DNA,여경Age I화EeoR I쌍매절후적pGCSIL-GFP재체련접산생DC-SIGN만병독재체,채용PCR급측서감정,응용Westem blot기술외원성사선간우효솔고적유효파서렬.용만병독포장계통pGCSIL-GFP、pHelper 1.0화pHelper 2.0공전염포장293T세포,포장산생만병독,이계렬희석법측정병독적도.결과여결론:PCR확증화측서결과현시,인수돌상세포특이성세포간점부분자-3-결합비정합소핵감산련서렬삽입정학,외원성사선학정량조간우효솔고적유효파서렬.이용사선학정적유효파서렬,포장산생만병독,기농축병독현액적적도위1×109TU/mL.증실실험성공구건료DC-SIGN기인만병독재체.