中国动物传染病学报
中國動物傳染病學報
중국동물전염병학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2011年
1期
45-50
,共6页
赵秀敏%高勤学%陈鸿军%韩先干%丁铲
趙秀敏%高勤學%陳鴻軍%韓先榦%丁鏟
조수민%고근학%진홍군%한선간%정산
嗜水气单胞茵%溶血素%克隆%表达%大肠杆菌
嗜水氣單胞茵%溶血素%剋隆%錶達%大腸桿菌
기수기단포인%용혈소%극륭%표체%대장간균
根据已发表的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)溶血素A基因序列设计一对特异性引物,以TPS30茵株基因组为模板,通过PCR扩增溶血素A基因,经T-A克隆、序列测定和分析,结果表明,该基因包含1482 bp碱基,编码494个氨基酸.将溶血素A定向克隆至表达载体pET32a(+)中,构建重组表达质粒pETTHA,在IPTG诱导下成功获得重组表达蛋白His-GroEL,大小为68 kDa.对该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达特性分析表明,最佳的诱导表达条件为:在0.1 mmol/L的IPTG浓度下,21℃诱导表达3 h.表达的溶血素A蛋白纯化后免疫小鼠,经Western blot检测,表明该蛋白具有免疫原性.对纯化的溶血素A蛋白复性后,进行溶血实验,结果表明该蛋白具有溶血活性.通过本实验的研究,为进一步研究嗜水气单胞茵溶血素的生物学功能奠定了基础.
根據已髮錶的嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)溶血素A基因序列設計一對特異性引物,以TPS30茵株基因組為模闆,通過PCR擴增溶血素A基因,經T-A剋隆、序列測定和分析,結果錶明,該基因包含1482 bp堿基,編碼494箇氨基痠.將溶血素A定嚮剋隆至錶達載體pET32a(+)中,構建重組錶達質粒pETTHA,在IPTG誘導下成功穫得重組錶達蛋白His-GroEL,大小為68 kDa.對該質粒在大腸桿菌BL21(DE3)中的錶達特性分析錶明,最佳的誘導錶達條件為:在0.1 mmol/L的IPTG濃度下,21℃誘導錶達3 h.錶達的溶血素A蛋白純化後免疫小鼠,經Western blot檢測,錶明該蛋白具有免疫原性.對純化的溶血素A蛋白複性後,進行溶血實驗,結果錶明該蛋白具有溶血活性.通過本實驗的研究,為進一步研究嗜水氣單胞茵溶血素的生物學功能奠定瞭基礎.
근거이발표적기수기단포균(Aeromonas hydrophila,Ah)용혈소A기인서렬설계일대특이성인물,이TPS30인주기인조위모판,통과PCR확증용혈소A기인,경T-A극륭、서렬측정화분석,결과표명,해기인포함1482 bp감기,편마494개안기산.장용혈소A정향극륭지표체재체pET32a(+)중,구건중조표체질립pETTHA,재IPTG유도하성공획득중조표체단백His-GroEL,대소위68 kDa.대해질립재대장간균BL21(DE3)중적표체특성분석표명,최가적유도표체조건위:재0.1 mmol/L적IPTG농도하,21℃유도표체3 h.표체적용혈소A단백순화후면역소서,경Western blot검측,표명해단백구유면역원성.대순화적용혈소A단백복성후,진행용혈실험,결과표명해단백구유용혈활성.통과본실험적연구,위진일보연구기수기단포인용혈소적생물학공능전정료기출.
