畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
12期
1732-1737
,共6页
骆继怀%独军政%高闪电%张国锋%常惠芸
駱繼懷%獨軍政%高閃電%張國鋒%常惠蕓
락계부%독군정%고섬전%장국봉%상혜예
FMDV%siRNA%转染%PK-15细胞%αv亚基基因%病毒滴度
FMDV%siRNA%轉染%PK-15細胞%αv亞基基因%病毒滴度
FMDV%siRNA%전염%PK-15세포%αv아기기인%병독적도
筛选靶向FMDV受体猪源整联蛋白αv亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA.根据猪源αv mRNA序列,设计并合成siRNA,Lipofectamine 2000转染siRNA于PK-15细胞,利用qRT-PCR检测RNAi组(iαv-480、iαv-1719和iαv-2077)、空白组(Mock)和阴性对照组(Control)中αvmRNA表达情况；在转染siRNA12 h后通过接种100 TCID50,收集病毒液,测定TCID50,确定其抗病性变化.结果显示,瞬间转染PK-15后,与阴性对照组和空白组相比,3个RNAi组均不同程度抑制αv亚基基因表达,在24 h iαv-480组在mRNA水平抑制90.1％,作用最明显.TCID50测定表明iαv-480组有较低的病毒滴度,说明其抗病性增加.针对猪源整联蛋白αv亚基基因的最佳siRNA的筛选成功,为深入研究干扰FMDV受体抗FMDV转基因路线奠定了基础.
篩選靶嚮FMDV受體豬源整聯蛋白αv亞基基因抑製FMDV複製的最佳siRNA.根據豬源αv mRNA序列,設計併閤成siRNA,Lipofectamine 2000轉染siRNA于PK-15細胞,利用qRT-PCR檢測RNAi組(iαv-480、iαv-1719和iαv-2077)、空白組(Mock)和陰性對照組(Control)中αvmRNA錶達情況；在轉染siRNA12 h後通過接種100 TCID50,收集病毒液,測定TCID50,確定其抗病性變化.結果顯示,瞬間轉染PK-15後,與陰性對照組和空白組相比,3箇RNAi組均不同程度抑製αv亞基基因錶達,在24 h iαv-480組在mRNA水平抑製90.1％,作用最明顯.TCID50測定錶明iαv-480組有較低的病毒滴度,說明其抗病性增加.針對豬源整聯蛋白αv亞基基因的最佳siRNA的篩選成功,為深入研究榦擾FMDV受體抗FMDV轉基因路線奠定瞭基礎.
사선파향FMDV수체저원정련단백αv아기기인억제FMDV복제적최가siRNA.근거저원αv mRNA서렬,설계병합성siRNA,Lipofectamine 2000전염siRNA우PK-15세포,이용qRT-PCR검측RNAi조(iαv-480、iαv-1719화iαv-2077)、공백조(Mock)화음성대조조(Control)중αvmRNA표체정황；재전염siRNA12 h후통과접충100 TCID50,수집병독액,측정TCID50,학정기항병성변화.결과현시,순간전염PK-15후,여음성대조조화공백조상비,3개RNAi조균불동정도억제αv아기기인표체,재24 h iαv-480조재mRNA수평억제90.1％,작용최명현.TCID50측정표명iαv-480조유교저적병독적도,설명기항병성증가.침대저원정련단백αv아기기인적최가siRNA적사선성공,위심입연구간우FMDV수체항FMDV전기인로선전정료기출.
