中药新药与临床药理
中藥新藥與臨床藥理
중약신약여림상약리
TRADITIONAL CHINESE DRUG RESEARCH&CLINICAL PHARMACOLOGY
2012年
4期
431-434
,共4页
孙敬和%冼绍祥%黄习文%秦佳佳%王陵军%杨忠奇
孫敬和%冼紹祥%黃習文%秦佳佳%王陵軍%楊忠奇
손경화%승소상%황습문%진가가%왕릉군%양충기
黄芪甲苷%5-氮胞苷%骨髓间充质干细胞%心肌细胞
黃芪甲苷%5-氮胞苷%骨髓間充質榦細胞%心肌細胞
황기갑감%5-담포감%골수간충질간세포%심기세포
目的 探讨黄芪甲苷(AST)与5-氮胞苷(5-aza)联合应用对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的影响.方法 采用贴壁培养法分离大鼠MSCs,流式细胞仪检测MSCs表面抗原CD34和CD44.分组诱导培养4周:Ⅰ组(空白对照组)、Ⅱ组(100 mg/L AST+5 μmol/L 5-aza)、Ⅲ组(10 μmol/L 5-aza)、Ⅳ组(5μmol/L 5-aza).利用免疫荧光法对诱导后细胞进行鉴定,观察心肌特异性结构蛋白cTnT、Desmin的表达,计算诱导分化率.采用逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)法检测诱导后MSCs中心钠素(ANP)mRNA的表达水平；以ELISA法检测诱导后细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的水平.结果 大鼠MSCs细胞表面抗原CD34阴性,CD44阳性；药物诱导后细胞形态发生显著变化,AST联合5-aza诱导能高效表达心肌特异性蛋白cTnT、Desmin,诱导分化率别为8.33％,18.00％.提高ANP mRNA的表达水平,亦能显著增加诱导后细胞内cAMP的含量.其作用效果与5μmol/L 5-aza诱导组比较,具有显著性差异(P＜0.05或P＜ 0.01),与10 μmol/L 5-aza诱导组作用效果相当(P＞0.05).结论 黄芪甲苷联合5-氮胞苷能在体外成功诱导MSCs分化为心肌样细胞,可使5-aza最佳诱导浓度从10 μmol/L降至5μmol/L,而诱导效果不变.AST联合5-aza诱导后细胞与正常心肌细胞不仅形似,更具备相似的生理功能.
目的 探討黃芪甲苷(AST)與5-氮胞苷(5-aza)聯閤應用對骨髓間充質榦細胞(MSCs)分化為心肌樣細胞的影響.方法 採用貼壁培養法分離大鼠MSCs,流式細胞儀檢測MSCs錶麵抗原CD34和CD44.分組誘導培養4週:Ⅰ組(空白對照組)、Ⅱ組(100 mg/L AST+5 μmol/L 5-aza)、Ⅲ組(10 μmol/L 5-aza)、Ⅳ組(5μmol/L 5-aza).利用免疫熒光法對誘導後細胞進行鑒定,觀察心肌特異性結構蛋白cTnT、Desmin的錶達,計算誘導分化率.採用逆轉錄聚閤酶鏈反應( RT-PCR)法檢測誘導後MSCs中心鈉素(ANP)mRNA的錶達水平；以ELISA法檢測誘導後細胞內環燐痠腺苷(cAMP)的水平.結果 大鼠MSCs細胞錶麵抗原CD34陰性,CD44暘性；藥物誘導後細胞形態髮生顯著變化,AST聯閤5-aza誘導能高效錶達心肌特異性蛋白cTnT、Desmin,誘導分化率彆為8.33％,18.00％.提高ANP mRNA的錶達水平,亦能顯著增加誘導後細胞內cAMP的含量.其作用效果與5μmol/L 5-aza誘導組比較,具有顯著性差異(P＜0.05或P＜ 0.01),與10 μmol/L 5-aza誘導組作用效果相噹(P＞0.05).結論 黃芪甲苷聯閤5-氮胞苷能在體外成功誘導MSCs分化為心肌樣細胞,可使5-aza最佳誘導濃度從10 μmol/L降至5μmol/L,而誘導效果不變.AST聯閤5-aza誘導後細胞與正常心肌細胞不僅形似,更具備相似的生理功能.
목적 탐토황기갑감(AST)여5-담포감(5-aza)연합응용대골수간충질간세포(MSCs)분화위심기양세포적영향.방법 채용첩벽배양법분리대서MSCs,류식세포의검측MSCs표면항원CD34화CD44.분조유도배양4주:Ⅰ조(공백대조조)、Ⅱ조(100 mg/L AST+5 μmol/L 5-aza)、Ⅲ조(10 μmol/L 5-aza)、Ⅳ조(5μmol/L 5-aza).이용면역형광법대유도후세포진행감정,관찰심기특이성결구단백cTnT、Desmin적표체,계산유도분화솔.채용역전록취합매련반응( RT-PCR)법검측유도후MSCs중심납소(ANP)mRNA적표체수평；이ELISA법검측유도후세포내배린산선감(cAMP)적수평.결과 대서MSCs세포표면항원CD34음성,CD44양성；약물유도후세포형태발생현저변화,AST연합5-aza유도능고효표체심기특이성단백cTnT、Desmin,유도분화솔별위8.33％,18.00％.제고ANP mRNA적표체수평,역능현저증가유도후세포내cAMP적함량.기작용효과여5μmol/L 5-aza유도조비교,구유현저성차이(P＜0.05혹P＜ 0.01),여10 μmol/L 5-aza유도조작용효과상당(P＞0.05).결론 황기갑감연합5-담포감능재체외성공유도MSCs분화위심기양세포,가사5-aza최가유도농도종10 μmol/L강지5μmol/L,이유도효과불변.AST연합5-aza유도후세포여정상심기세포불부형사,경구비상사적생리공능.
