中华肿瘤杂志
中華腫瘤雜誌
중화종류잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY
2007年
10期
728-732
,共5页
杨静悦%刘文超%曹大勇%斯小明%腾增辉
楊靜悅%劉文超%曹大勇%斯小明%騰增輝
양정열%류문초%조대용%사소명%등증휘
HBsAg基因%树突状细胞%HepG2.2.15肝癌细胞
HBsAg基因%樹突狀細胞%HepG2.2.15肝癌細胞
HBsAg기인%수돌상세포%HepG2.2.15간암세포
目的 研究腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞(DC)体外诱导对HepG2.2.15肝癌细胞特异性的细胞毒效应.方法 将HBsAg基因亚克隆到pIND和pShuttle载体中,构建重组载体pShuttle-S.将用PI-Sce Ⅰ和Ⅰ-Ceu Ⅰ双酶切后所获得的HBsAg基因片段与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成腺病毒表达载体AdVHBsAg.经HEK293细胞包装腺病毒后,收获病毒并做滴度测定,再将AdVHBsAg转染人单核细胞来源的DC构建AdVHBsAg-DC肝癌瘤苗.采用Western blot法鉴定转染基因表达;流式细胞仪检测表面分子;3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)法检测T细胞增殖反应的能力;乳酸脱氢酶(LDH)法检测CTL活性.结果 穿梭质粒插入片段为HBsAg基因;包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可在HEK293细胞中形成病毒颗粒;HBsAg基因表达于AdVHBsAg-DC中,表明腺病毒介导的HBsAg基因转染的有效性;AdVHBsAg-DC可高表达CD1a、CD11c、CD80、CD86和HLA-DR;AdVHBsAg-DC刺激自体T细胞增殖功能明显高于AdVLacZ-DC组和未转染的DC组(P＜0.05);AdVHBsAg-DC体外诱导CTL能够对表达HBsAg肝癌细胞起到特异性杀伤作用.结论 AdVHBsAg可在DC中表达HBsAg肝癌相关抗原;AdVHBsAg-DC瘤苗可诱导T细胞产生高效的针对HepG2.2.15肝癌细胞的细胞毒效应.
目的 研究腺病毒介導的HBsAg基因脩飾樹突狀細胞(DC)體外誘導對HepG2.2.15肝癌細胞特異性的細胞毒效應.方法 將HBsAg基因亞剋隆到pIND和pShuttle載體中,構建重組載體pShuttle-S.將用PI-Sce Ⅰ和Ⅰ-Ceu Ⅰ雙酶切後所穫得的HBsAg基因片段與線性化的腺病毒載體pAdeno-X連接,構成腺病毒錶達載體AdVHBsAg.經HEK293細胞包裝腺病毒後,收穫病毒併做滴度測定,再將AdVHBsAg轉染人單覈細胞來源的DC構建AdVHBsAg-DC肝癌瘤苗.採用Western blot法鑒定轉染基因錶達;流式細胞儀檢測錶麵分子;3H-胸腺嘧啶覈苷(3H-TdR)法檢測T細胞增殖反應的能力;乳痠脫氫酶(LDH)法檢測CTL活性.結果 穿梭質粒插入片段為HBsAg基因;包裝的腺病毒載體具有良好的感染性,可在HEK293細胞中形成病毒顆粒;HBsAg基因錶達于AdVHBsAg-DC中,錶明腺病毒介導的HBsAg基因轉染的有效性;AdVHBsAg-DC可高錶達CD1a、CD11c、CD80、CD86和HLA-DR;AdVHBsAg-DC刺激自體T細胞增殖功能明顯高于AdVLacZ-DC組和未轉染的DC組(P＜0.05);AdVHBsAg-DC體外誘導CTL能夠對錶達HBsAg肝癌細胞起到特異性殺傷作用.結論 AdVHBsAg可在DC中錶達HBsAg肝癌相關抗原;AdVHBsAg-DC瘤苗可誘導T細胞產生高效的針對HepG2.2.15肝癌細胞的細胞毒效應.
목적 연구선병독개도적HBsAg기인수식수돌상세포(DC)체외유도대HepG2.2.15간암세포특이성적세포독효응.방법 장HBsAg기인아극륭도pIND화pShuttle재체중,구건중조재체pShuttle-S.장용PI-Sce Ⅰ화Ⅰ-Ceu Ⅰ쌍매절후소획득적HBsAg기인편단여선성화적선병독재체pAdeno-X련접,구성선병독표체재체AdVHBsAg.경HEK293세포포장선병독후,수획병독병주적도측정,재장AdVHBsAg전염인단핵세포래원적DC구건AdVHBsAg-DC간암류묘.채용Western blot법감정전염기인표체;류식세포의검측표면분자;3H-흉선밀정핵감(3H-TdR)법검측T세포증식반응적능력;유산탈경매(LDH)법검측CTL활성.결과 천사질립삽입편단위HBsAg기인;포장적선병독재체구유량호적감염성,가재HEK293세포중형성병독과립;HBsAg기인표체우AdVHBsAg-DC중,표명선병독개도적HBsAg기인전염적유효성;AdVHBsAg-DC가고표체CD1a、CD11c、CD80、CD86화HLA-DR;AdVHBsAg-DC자격자체T세포증식공능명현고우AdVLacZ-DC조화미전염적DC조(P＜0.05);AdVHBsAg-DC체외유도CTL능구대표체HBsAg간암세포기도특이성살상작용.결론 AdVHBsAg가재DC중표체HBsAg간암상관항원;AdVHBsAg-DC류묘가유도T세포산생고효적침대HepG2.2.15간암세포적세포독효응.
