CAJ | 학술논문

目的:建立一种灵敏、特异和简便实用的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA表达水平的检测手段.方法:生物素标记Cyclin D1 5'端引物,PCR DIG Labeling Mix取代dNTP,RT-PCR终产物置于链霉亲和素包被的ELISA板中孵育,洗涤、显色后,自动酶联检测仪测A45onm值.常规RT-PCR方法作对照.检测对象包括Cyclin D1表达细胞系SGC7901,转染反义Cyclin D1基因的SGC7901D1AS细胞及转染空载体的SGC7901neo细胞,原发性胃癌组织30例、胃癌旁和正常胃黏膜组织20例,胃良性病变组织22例.结果:RT-PCR ELISA与RT-PCR琼脂糖电泳检测结果吻合,所测得的A450nm值与Cyclin D1特异性基因片段的丰度和检测细胞数量有一很好的对应关系.SGC7901胃癌细胞转染Cyclin D1反义基因后,Cyclin D1mRNA表达显著降低(P＜0.05).Cyclin D1 mRNA在胃良性疾病起即开始明显升高(P＜0.05).在胃癌各组中,进展期胃癌伴转移组的Cyclin D1 mRNA表达水平显著高于其他两组(P＜0.05).结论:本文建立的Cyclin D1 RT-PCR ELISA可作为一种侯选的、较为简便和半定量的cyclin D1 mRNA检测方法.致谢:第三军医大学数学教研室罗明奎主任在本课题结果统计分析的工作中给予了无私的指导和帮助.
목적:건립일충령민、특이화간편실용적세포주기단백D1(Cyclin D1)mRNA표체수평적검측수단.방법:생물소표기Cyclin D1 5'단인물,PCR DIG Labeling Mix취대dNTP,RT-PCR종산물치우련매친화소포피적ELISA판중부육,세조、현색후,자동매련검측의측A45onm치.상규RT-PCR방법작대조.검측대상포괄Cyclin D1표체세포계SGC7901,전염반의Cyclin D1기인적SGC7901D1AS세포급전염공재체적SGC7901neo세포,원발성위암조직30례、위암방화정상위점막조직20례,위량성병변조직22례.결과:RT-PCR ELISA여RT-PCR경지당전영검측결과문합,소측득적A450nm치여Cyclin D1특이성기인편단적봉도화검측세포수량유일흔호적대응관계.SGC7901위암세포전염Cyclin D1반의기인후,Cyclin D1mRNA표체현저강저(P＜0.05).Cyclin D1 mRNA재위량성질병기즉개시명현승고(P＜0.05).재위암각조중,진전기위암반전이조적Cyclin D1 mRNA표체수평현저고우기타량조(P＜0.05).결론:본문건립적Cyclin D1 RT-PCR ELISA가작위일충후선적、교위간편화반정량적cyclin D1 mRNA검측방법.치사:제삼군의대학수학교연실라명규주임재본과제결과통계분석적공작중급여료무사적지도화방조.