细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
1期
71-73
,共3页
邓宁%向军俭%粟宽源%王宏%唐勇
鄧寧%嚮軍儉%粟寬源%王宏%唐勇
산저%향군검%속관원%왕굉%당용
HBsAg%单链Fab%毕赤酵母
HBsAg%單鏈Fab%畢赤酵母
HBsAg%단련Fab%필적효모
目的:研究重组Fab的结构与亲和活性的关系.方法:通过重叠PCR,将人源性抗HBsAg Fab的H和L链基因融合构建单链Fab基因,并将其转入毕赤酵母表达载体pPICZαA中.以单链Fab基因表达载体通过氯化锂转化法转化毕赤酵母GS115.将获得的重组酵母在摇瓶中培养进行重组单链Fab的可溶性表达.表达上清经硫酸铵沉淀及亲和层析纯化后,用直接ELISA检测表达产物和纯化Fab的活性.结果:SDS-PAGE和Western blot分析显示,单链Fab在毕赤酵母中获得分泌型表达.薄层扫描显示,在摇瓶中培养毕赤酵母表达的单链Fab约为5～10 mg/L.经亲和层析纯化获得纯度达97.8%的重组单链Fab.经直接ELISA测定的结果显示,重组单链Fab具有较好的结合HBsAg的活性.结论:通过重叠PCR构建的融合单链Fab基因,可成功地在毕赤酵母中获得分泌型表达,表达产物具有较好的结合HBsAg的活性.
目的:研究重組Fab的結構與親和活性的關繫.方法:通過重疊PCR,將人源性抗HBsAg Fab的H和L鏈基因融閤構建單鏈Fab基因,併將其轉入畢赤酵母錶達載體pPICZαA中.以單鏈Fab基因錶達載體通過氯化鋰轉化法轉化畢赤酵母GS115.將穫得的重組酵母在搖瓶中培養進行重組單鏈Fab的可溶性錶達.錶達上清經硫痠銨沉澱及親和層析純化後,用直接ELISA檢測錶達產物和純化Fab的活性.結果:SDS-PAGE和Western blot分析顯示,單鏈Fab在畢赤酵母中穫得分泌型錶達.薄層掃描顯示,在搖瓶中培養畢赤酵母錶達的單鏈Fab約為5～10 mg/L.經親和層析純化穫得純度達97.8%的重組單鏈Fab.經直接ELISA測定的結果顯示,重組單鏈Fab具有較好的結閤HBsAg的活性.結論:通過重疊PCR構建的融閤單鏈Fab基因,可成功地在畢赤酵母中穫得分泌型錶達,錶達產物具有較好的結閤HBsAg的活性.
목적:연구중조Fab적결구여친화활성적관계.방법:통과중첩PCR,장인원성항HBsAg Fab적H화L련기인융합구건단련Fab기인,병장기전입필적효모표체재체pPICZαA중.이단련Fab기인표체재체통과록화리전화법전화필적효모GS115.장획득적중조효모재요병중배양진행중조단련Fab적가용성표체.표체상청경류산안침정급친화층석순화후,용직접ELISA검측표체산물화순화Fab적활성.결과:SDS-PAGE화Western blot분석현시,단련Fab재필적효모중획득분비형표체.박층소묘현시,재요병중배양필적효모표체적단련Fab약위5～10 mg/L.경친화층석순화획득순도체97.8%적중조단련Fab.경직접ELISA측정적결과현시,중조단련Fab구유교호적결합HBsAg적활성.결론:통과중첩PCR구건적융합단련Fab기인,가성공지재필적효모중획득분비형표체,표체산물구유교호적결합HBsAg적활성.
