真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法
진핵표체인호흡도합포병독F단백적순화방법
Purification of the fusion protein of human respiratory syncytial virus expressed in eukaryotic expression vector
  • 万方数据
    免疫学杂志 면역학잡지
    IMMUNOLOGICAL JOURNAL
    2008年 2期 188-191 ,共4页

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    目的 真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,SV)融合蛋白(fusion protein,),并完成蛋白纯化及纯度测定.方法 根据编码F蛋白的基因序列设计引物,CR方法扩增出3'端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,2 h后再用Westem blot检测目的蛋白的表达.Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度.结果 核酸序列分析证实获得带His标签的RSV F基因序列,没有发生无义突变.转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上.结论 初步建立了真核表达RSV F蛋白的纯化方法,为进一步优化RSV F蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础.
    목적 진핵표체인호흡도합포병독(human respiratory syncytial virus,SV)융합단백(fusion protein,),병완성단백순화급순도측정.방법 근거편마F단백적기인서렬설계인물,CR방법확증출3'단대His표첨적F기인서렬,극륭입pGEM-T-easy재체,경핵산서렬분석후,진일보극륭도pcDNA3.1(+)진핵표체재체,한제성내절매감정,용지질체Lipofectamine2000전염COS-7세포,2 h후재용Westem blot검측목적단백적표체.Ni주친화층석순화COS-7세포표체적F단백,고효모세관전영분석순화후단백순도.결과 핵산서렬분석증실획득대His표첨적RSV F기인서렬,몰유발생무의돌변.전염COS-7세포후,이용Western blot방법검측도F단백적특이성조대,순도체99%이상.결론 초보건립료진핵표체RSV F단백적순화방법,위진일보우화RSV F단백제비조건급단극륭항체급진단시제등연구전정료기출.
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