CAJ | 학술논문

背景与目的:近年来的研究显示核因子-KB(nuclear factor-kB, NF-kB)的活化能够调节肿瘤细胞的侵袭和转移.本研究探讨抑制NF-kB的活性对A549细胞侵袭能力的影响及其可能的机制.方法:构建表达NF-kB抑制物a同分异构体(inhibitor of NF-kB, α isoform, IkBα)的真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/IkBα.体外培养A549细胞,分为未转染组(不转染质粒)、转染pcDNA3.1(+)组、转染pcDNA3.1(+)/IkBα组,分别转染相应的质粒.应用RT-PCR、Western blot检测各组细胞IkBα的表达情况,应用凝胶电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测各组细胞NF-kB的活性,应用Transwell侵袭小室检测各组细胞的侵袭能力,应用RT-PCR方法检测各组细胞MMP-2、MMP-9的mRNA水平,应用明胶酶谱法检测各组细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的活性.结果:酶切鉴定结果显示pcDNA3.1(+)/IkBα质粒构建成功.RT-PCR和Western blot检测结果表明构建的pcDNA3.1(+)/IkBα质粒能够在A549细胞中表达IkBα.转染pcDNA3.1(+)/IkBα组A549细胞NF-kB活性、侵袭细胞数目、MMP-2活性及MMP-9活性均低于未转染组和转染pcDNA3.1(+)组(P值均<0.05),而转染pcDNA3.1(+)组与未转染组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论:转染IkBα基因能够抑制A549细胞中NF-KB的活性.NF-kB的活性下降能够抑制A549细胞的侵袭能力,其机制可能与MMP-2、MMP-9表达下调有关.
배경여목적:근년래적연구현시핵인자-KB(nuclear factor-kB, NF-kB)적활화능구조절종류세포적침습화전이.본연구탐토억제NF-kB적활성대A549세포침습능력적영향급기가능적궤제.방법:구건표체NF-kB억제물a동분이구체(inhibitor of NF-kB, α isoform, IkBα)적진핵표체중조질립pcDNA3.1(+)/IkBα.체외배양A549세포,분위미전염조(불전염질립)、전염pcDNA3.1(+)조、전염pcDNA3.1(+)/IkBα조,분별전염상응적질립.응용RT-PCR、Western blot검측각조세포IkBα적표체정황,응용응효전영천이솔개변실험(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)검측각조세포NF-kB적활성,응용Transwell침습소실검측각조세포적침습능력,응용RT-PCR방법검측각조세포MMP-2、MMP-9적mRNA수평,응용명효매보법검측각조세포기질금속단백매-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、기질금속단백매-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)적활성.결과:매절감정결과현시pcDNA3.1(+)/IkBα질립구건성공.RT-PCR화Western blot검측결과표명구건적pcDNA3.1(+)/IkBα질립능구재A549세포중표체IkBα.전염pcDNA3.1(+)/IkBα조A549세포NF-kB활성、침습세포수목、MMP-2활성급MMP-9활성균저우미전염조화전염pcDNA3.1(+)조(P치균<0.05),이전염pcDNA3.1(+)조여미전염조지간적차이균무통계학의의(P치균>0.05).결론:전염IkBα기인능구억제A549세포중NF-KB적활성.NF-kB적활성하강능구억제A549세포적침습능력,기궤제가능여MMP-2、MMP-9표체하조유관.