中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2009年
5期
425-431
,共7页
杨敬华%周巧玲%王衍慧%刘抗寒%张军
楊敬華%週巧玲%王衍慧%劉抗寒%張軍
양경화%주교령%왕연혜%류항한%장군
蛋白激酶C%基质金属蛋白酶%金属蛋白酶组织抑制物%糖尿病肾病%系膜细胞
蛋白激酶C%基質金屬蛋白酶%金屬蛋白酶組織抑製物%糖尿病腎病%繫膜細胞
단백격매C%기질금속단백매%금속단백매조직억제물%당뇨병신병%계막세포
目的:研究体外高糖环境下人类肾小球系膜细胞(NHMC)中PKC激活或使用PKC抑制剂干预后 MMP2,9/TIMP1,2的表达,探讨PKC与MMPs/TIMPs信号转导在糖尿病肾病发生发展中的作用.方法:将NHMC分4组: N组(对照组,5 mmol/L葡萄糖);H组(高糖组,30 mmol/L葡萄糖);P组(抑制剂组,30 mmol/L葡萄糖+10-5mol/L白屈菜红碱);M组(甘露醇组,5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇).分别于上述4种不同成分培养基中进行细胞培养,第24,48,72 h用MTT法测定NHMC增殖;并于培养后第24,48 h收集细胞,抽提mRNA及蛋白质,用ELISA方法测定胞膜、胞核蛋白质PKC活性.用RT-PCR和Western 印迹方法检测MMP2,9, TIMP1,2 mRNA和蛋白质的表达.结果:高糖组细胞膜和胞核部分的PKC活性较对照组明显升高(P＜0.01), MMP2,9, TIMP1,2 mRNA及蛋白质的表达较对照组明显上升(P＜0.01);而MMP-9/TIMP-1, MMP-2/TIMP-2比值较对照组明显下降(P＜0.05). 高糖加PKC抑制剂白屈菜红碱后,MMP2,9, TIMP1 mRNA及蛋白质表达较对照组明显升高 (P＜0.01),但MMP9/TIMP1, MMP2/TIMP2比值较高糖组明显升高(分别P＜0.05,P<0.01).PKC活性与MMP-2/TIMP-2及MMP-9/TIMP-1的蛋白质比值均呈负相关(分别r=-0.651,r=-0.702,均P＜0.05).结论:高糖可刺激人类肾小球系膜细胞PKC活化,在DN中PKC活化与MMP2,9/TIMP1,2的表达水平有密切关系.
目的:研究體外高糖環境下人類腎小毬繫膜細胞(NHMC)中PKC激活或使用PKC抑製劑榦預後 MMP2,9/TIMP1,2的錶達,探討PKC與MMPs/TIMPs信號轉導在糖尿病腎病髮生髮展中的作用.方法:將NHMC分4組: N組(對照組,5 mmol/L葡萄糖);H組(高糖組,30 mmol/L葡萄糖);P組(抑製劑組,30 mmol/L葡萄糖+10-5mol/L白屈菜紅堿);M組(甘露醇組,5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇).分彆于上述4種不同成分培養基中進行細胞培養,第24,48,72 h用MTT法測定NHMC增殖;併于培養後第24,48 h收集細胞,抽提mRNA及蛋白質,用ELISA方法測定胞膜、胞覈蛋白質PKC活性.用RT-PCR和Western 印跡方法檢測MMP2,9, TIMP1,2 mRNA和蛋白質的錶達.結果:高糖組細胞膜和胞覈部分的PKC活性較對照組明顯升高(P＜0.01), MMP2,9, TIMP1,2 mRNA及蛋白質的錶達較對照組明顯上升(P＜0.01);而MMP-9/TIMP-1, MMP-2/TIMP-2比值較對照組明顯下降(P＜0.05). 高糖加PKC抑製劑白屈菜紅堿後,MMP2,9, TIMP1 mRNA及蛋白質錶達較對照組明顯升高 (P＜0.01),但MMP9/TIMP1, MMP2/TIMP2比值較高糖組明顯升高(分彆P＜0.05,P<0.01).PKC活性與MMP-2/TIMP-2及MMP-9/TIMP-1的蛋白質比值均呈負相關(分彆r=-0.651,r=-0.702,均P＜0.05).結論:高糖可刺激人類腎小毬繫膜細胞PKC活化,在DN中PKC活化與MMP2,9/TIMP1,2的錶達水平有密切關繫.
목적:연구체외고당배경하인류신소구계막세포(NHMC)중PKC격활혹사용PKC억제제간예후 MMP2,9/TIMP1,2적표체,탐토PKC여MMPs/TIMPs신호전도재당뇨병신병발생발전중적작용.방법:장NHMC분4조: N조(대조조,5 mmol/L포도당);H조(고당조,30 mmol/L포도당);P조(억제제조,30 mmol/L포도당+10-5mol/L백굴채홍감);M조(감로순조,5 mmol/L포도당+25 mmol/L감로순).분별우상술4충불동성분배양기중진행세포배양,제24,48,72 h용MTT법측정NHMC증식;병우배양후제24,48 h수집세포,추제mRNA급단백질,용ELISA방법측정포막、포핵단백질PKC활성.용RT-PCR화Western 인적방법검측MMP2,9, TIMP1,2 mRNA화단백질적표체.결과:고당조세포막화포핵부분적PKC활성교대조조명현승고(P＜0.01), MMP2,9, TIMP1,2 mRNA급단백질적표체교대조조명현상승(P＜0.01);이MMP-9/TIMP-1, MMP-2/TIMP-2비치교대조조명현하강(P＜0.05). 고당가PKC억제제백굴채홍감후,MMP2,9, TIMP1 mRNA급단백질표체교대조조명현승고 (P＜0.01),단MMP9/TIMP1, MMP2/TIMP2비치교고당조명현승고(분별P＜0.05,P<0.01).PKC활성여MMP-2/TIMP-2급MMP-9/TIMP-1적단백질비치균정부상관(분별r=-0.651,r=-0.702,균P＜0.05).결론:고당가자격인류신소구계막세포PKC활화,재DN중PKC활화여MMP2,9/TIMP1,2적표체수평유밀절관계.
