生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
1期
139-142,152
,共5页
贺文%赵雪彦%姚敏%史海水%许丽辉%刘昆%姜玲玲
賀文%趙雪彥%姚敏%史海水%許麗輝%劉昆%薑玲玲
하문%조설언%요민%사해수%허려휘%류곤%강령령
D-双功能蛋白%原核表达%包涵体%大鼠
D-雙功能蛋白%原覈錶達%包涵體%大鼠
D-쌍공능단백%원핵표체%포함체%대서
利用原核表达系统构建大鼠D-双功能蛋白表达栽体.设计基因拼接引物,通过RT-PCR合成DBP基因cDNA序列,将酶切、纯化的DBP基因与经相同处理的表达栽体pET-28a相连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子.将通过酶切及序列分析鉴定阳性的重组子质粒转入感受态大肠杆菌BL21-gold表达菌中,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析目的蛋白表达情况.结果显示,成功获得了包含DBP基因的双链cDNA序列,酶切、序列分析及Western blotting证实成功构建了DBP基因的原核表达载体.通过原核表达系统,DBP蛋白以包涵体形式产生,复性后可获得高表达的目的蛋白.
利用原覈錶達繫統構建大鼠D-雙功能蛋白錶達栽體.設計基因拼接引物,通過RT-PCR閤成DBP基因cDNA序列,將酶切、純化的DBP基因與經相同處理的錶達栽體pET-28a相連接,轉化感受態大腸桿菌DH5α,篩選暘性重組子.將通過酶切及序列分析鑒定暘性的重組子質粒轉入感受態大腸桿菌BL21-gold錶達菌中,經IPTG誘導錶達,通過SDS-PAGE分析目的蛋白錶達情況.結果顯示,成功穫得瞭包含DBP基因的雙鏈cDNA序列,酶切、序列分析及Western blotting證實成功構建瞭DBP基因的原覈錶達載體.通過原覈錶達繫統,DBP蛋白以包涵體形式產生,複性後可穫得高錶達的目的蛋白.
이용원핵표체계통구건대서D-쌍공능단백표체재체.설계기인병접인물,통과RT-PCR합성DBP기인cDNA서렬,장매절、순화적DBP기인여경상동처리적표체재체pET-28a상련접,전화감수태대장간균DH5α,사선양성중조자.장통과매절급서렬분석감정양성적중조자질립전입감수태대장간균BL21-gold표체균중,경IPTG유도표체,통과SDS-PAGE분석목적단백표체정황.결과현시,성공획득료포함DBP기인적쌍련cDNA서렬,매절、서렬분석급Western blotting증실성공구건료DBP기인적원핵표체재체.통과원핵표체계통,DBP단백이포함체형식산생,복성후가획득고표체적목적단백.
