广东农业科学
廣東農業科學
엄동농업과학
GUANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
4期
97-100
,共4页
刘遵春%苗卫东%刘大亮%陈学森
劉遵春%苗衛東%劉大亮%陳學森
류준춘%묘위동%류대량%진학삼
新疆野苹果%SSR-PCR%优化
新疆野蘋果%SSR-PCR%優化
신강야평과%SSR-PCR%우화
以4个新疆野苹果株系为试材,利用CTAB法提取DNA,对影响SSR-PCR扩增结果的主要因子设计了多梯度的优化试验.结果表明:新疆野苹果SSR-PCR反应体系(25 μL)中含Taq DNA聚合酶0.5 U、模板DNA 5.0 ng、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.2 μmol/L、Mg2+1.0 mmol/L、退火温度为60℃时效果最佳.最佳扩增程序为:94℃预变性2min,94℃变性30 s,65C退火1 min,72℃延伸1 min,4个循环;94℃变性30 s,60℃退火1 min,72℃延伸1 min,30个循环;72C延伸5 min,4℃保存.利川此反应体系对30份新疆野苹果进行SSR-PCR扩增和电泳检测,扩增谱带清晰且多态性较好,表明该体系适用于新疆野苹果的基因连锁图谱构建和QTL定位.
以4箇新疆野蘋果株繫為試材,利用CTAB法提取DNA,對影響SSR-PCR擴增結果的主要因子設計瞭多梯度的優化試驗.結果錶明:新疆野蘋果SSR-PCR反應體繫(25 μL)中含Taq DNA聚閤酶0.5 U、模闆DNA 5.0 ng、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.2 μmol/L、Mg2+1.0 mmol/L、退火溫度為60℃時效果最佳.最佳擴增程序為:94℃預變性2min,94℃變性30 s,65C退火1 min,72℃延伸1 min,4箇循環;94℃變性30 s,60℃退火1 min,72℃延伸1 min,30箇循環;72C延伸5 min,4℃保存.利川此反應體繫對30份新疆野蘋果進行SSR-PCR擴增和電泳檢測,擴增譜帶清晰且多態性較好,錶明該體繫適用于新疆野蘋果的基因連鎖圖譜構建和QTL定位.
이4개신강야평과주계위시재,이용CTAB법제취DNA,대영향SSR-PCR확증결과적주요인자설계료다제도적우화시험.결과표명:신강야평과SSR-PCR반응체계(25 μL)중함Taq DNA취합매0.5 U、모판DNA 5.0 ng、dNTPs 0.2 mmol/L、인물0.2 μmol/L、Mg2+1.0 mmol/L、퇴화온도위60℃시효과최가.최가확증정서위:94℃예변성2min,94℃변성30 s,65C퇴화1 min,72℃연신1 min,4개순배;94℃변성30 s,60℃퇴화1 min,72℃연신1 min,30개순배;72C연신5 min,4℃보존.리천차반응체계대30빈신강야평과진행SSR-PCR확증화전영검측,확증보대청석차다태성교호,표명해체계괄용우신강야평과적기인련쇄도보구건화QTL정위.
