中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2004年
2期
94-97
,共4页
莫凌%张文宏%王骥%庞茂银%翁心华
莫凌%張文宏%王驥%龐茂銀%翁心華
막릉%장문굉%왕기%방무은%옹심화
分枝杆菌,结核%过氧化氢酶%点突变诱变,定点%异烟肼%抗药性,微生物
分枝桿菌,結覈%過氧化氫酶%點突變誘變,定點%異煙肼%抗藥性,微生物
분지간균,결핵%과양화경매%점돌변유변,정점%이연정%항약성,미생물
目的探讨过氧化氢酶编码基因(KatG)基因点突变和结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药性之间的关系,筛选相关位点用于筛查临床INH耐药株基因型.方法采用三步法聚合酶链反应(PCR)对临床耐异烟肼菌株中发现的6个位点进行定点诱变,用含诱变基因的pET24b质粒转化大肠埃希菌BL21菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,使用镍亲和柱和Q-琼脂糖快速流动凝胶纯化各KatG诱变蛋白并测定其过氧化氢酶和过氧化物酶活性.结果完成KatG基因6个位点的诱变及相应诱变蛋白的表达和纯化,过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定发现,3个诱变蛋白[KatG(W321G)、KatG(R418Q)和KatG(A456S)]基本失活,其余3个诱变蛋白的活性亦有不同程度下降.结论所引入的6个突变均可造成KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性下降,与结核分枝杆菌INH耐药有关,可用于筛查临床INH耐药株基因型.
目的探討過氧化氫酶編碼基因(KatG)基因點突變和結覈分枝桿菌異煙肼(INH)耐藥性之間的關繫,篩選相關位點用于篩查臨床INH耐藥株基因型.方法採用三步法聚閤酶鏈反應(PCR)對臨床耐異煙肼菌株中髮現的6箇位點進行定點誘變,用含誘變基因的pET24b質粒轉化大腸埃希菌BL21菌株,在異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導下錶達,使用鎳親和柱和Q-瓊脂糖快速流動凝膠純化各KatG誘變蛋白併測定其過氧化氫酶和過氧化物酶活性.結果完成KatG基因6箇位點的誘變及相應誘變蛋白的錶達和純化,過氧化氫酶、過氧化物酶活性測定髮現,3箇誘變蛋白[KatG(W321G)、KatG(R418Q)和KatG(A456S)]基本失活,其餘3箇誘變蛋白的活性亦有不同程度下降.結論所引入的6箇突變均可造成KatG蛋白過氧化氫-過氧化物酶活性下降,與結覈分枝桿菌INH耐藥有關,可用于篩查臨床INH耐藥株基因型.
목적탐토과양화경매편마기인(KatG)기인점돌변화결핵분지간균이연정(INH)내약성지간적관계,사선상관위점용우사사림상INH내약주기인형.방법채용삼보법취합매련반응(PCR)대림상내이연정균주중발현적6개위점진행정점유변,용함유변기인적pET24b질립전화대장애희균BL21균주,재이병기류대-β-D반유당감(IPTG)유도하표체,사용얼친화주화Q-경지당쾌속류동응효순화각KatG유변단백병측정기과양화경매화과양화물매활성.결과완성KatG기인6개위점적유변급상응유변단백적표체화순화,과양화경매、과양화물매활성측정발현,3개유변단백[KatG(W321G)、KatG(R418Q)화KatG(A456S)]기본실활,기여3개유변단백적활성역유불동정도하강.결론소인입적6개돌변균가조성KatG단백과양화경-과양화물매활성하강,여결핵분지간균INH내약유관,가용우사사림상INH내약주기인형.
