畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2005年
1期
48-53
,共6页
石德时%兰盛银%洪文洲%吴美洲%陈焕春
石德時%蘭盛銀%洪文洲%吳美洲%陳煥春
석덕시%란성은%홍문주%오미주%진환춘
PrV%Ea株%gD基因%体外表达%细胞系%逆转录病毒介导
PrV%Ea株%gD基因%體外錶達%細胞繫%逆轉錄病毒介導
PrV%Ea주%gD기인%체외표체%세포계%역전록병독개도
采用逆转录病毒介导的方法,将PrV Ea株gD基因整合进PK-15细胞染色体中,建立起表达gD蛋白的细胞系PKD.通过荧光观察,发现PKD表达的gD分布在细胞膜上,具备原有的免疫反应性;同时,还发现gD蛋白在PKD细胞膜上呈明显极性分布.PCR技术和间接免疫荧光染色法对PKD进行检测的结果表明该细胞系具有良好的遗传稳定性.在相同培养条件下,PKD细胞的生长速度及形态与正常PK-15细胞无明显差异.用脂质体介导的方法,将PrV Ea株基因组转染PKD细胞,在转染后30 h细胞发生典型病变,表明PKD细胞对脂质体的毒害具有耐受性.TCID50测定结果显示:PKD对PrV Ea株增殖尽管有明显的抑制作用,但PrV Ea株仍能在其上正常增殖.上述研究结果提示:所构建的细胞系PKD可用于构建PrV Ea株 gD基因缺失毒株,为PrV Ea株gD基因缺失毒株的构建提供了必备的工具.
採用逆轉錄病毒介導的方法,將PrV Ea株gD基因整閤進PK-15細胞染色體中,建立起錶達gD蛋白的細胞繫PKD.通過熒光觀察,髮現PKD錶達的gD分佈在細胞膜上,具備原有的免疫反應性;同時,還髮現gD蛋白在PKD細胞膜上呈明顯極性分佈.PCR技術和間接免疫熒光染色法對PKD進行檢測的結果錶明該細胞繫具有良好的遺傳穩定性.在相同培養條件下,PKD細胞的生長速度及形態與正常PK-15細胞無明顯差異.用脂質體介導的方法,將PrV Ea株基因組轉染PKD細胞,在轉染後30 h細胞髮生典型病變,錶明PKD細胞對脂質體的毒害具有耐受性.TCID50測定結果顯示:PKD對PrV Ea株增殖儘管有明顯的抑製作用,但PrV Ea株仍能在其上正常增殖.上述研究結果提示:所構建的細胞繫PKD可用于構建PrV Ea株 gD基因缺失毒株,為PrV Ea株gD基因缺失毒株的構建提供瞭必備的工具.
채용역전록병독개도적방법,장PrV Ea주gD기인정합진PK-15세포염색체중,건립기표체gD단백적세포계PKD.통과형광관찰,발현PKD표체적gD분포재세포막상,구비원유적면역반응성;동시,환발현gD단백재PKD세포막상정명현겁성분포.PCR기술화간접면역형광염색법대PKD진행검측적결과표명해세포계구유량호적유전은정성.재상동배양조건하,PKD세포적생장속도급형태여정상PK-15세포무명현차이.용지질체개도적방법,장PrV Ea주기인조전염PKD세포,재전염후30 h세포발생전형병변,표명PKD세포대지질체적독해구유내수성.TCID50측정결과현시:PKD대PrV Ea주증식진관유명현적억제작용,단PrV Ea주잉능재기상정상증식.상술연구결과제시:소구건적세포계PKD가용우구건PrV Ea주 gD기인결실독주,위PrV Ea주gD기인결실독주적구건제공료필비적공구.
