中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2005年
1期
37-43
,共7页
陈向岭%袁汉英%何炜%胡翔华%吕红%李育阳
陳嚮嶺%袁漢英%何煒%鬍翔華%呂紅%李育暘
진향령%원한영%하위%호상화%려홍%리육양
同源重组%酿酒酵母%表达质粒
同源重組%釀酒酵母%錶達質粒
동원중조%양주효모%표체질립
利用同源重组的方法,构建了具有高拷贝数和高稳定性的新型酿酒酵母表达质粒.对酵母附加体型载体pHC11进行一系列改造,得到质粒pHC11R,并用适当的酶切线性化;利用PCR反应得到人IFNα2b表达单元片段,它的两端和线性化的pHC11R的两端具有50 bp左右的同源区段.上述两个片段共转化酿酒酵母,在酵母体内经同源重组后得到表达质粒pHC11R-IFNα2b,该表达质粒与pHC11-IFNα2b相比去除了质粒上用于在大肠杆菌中复制和筛选所需的序列,在宿主菌中的稳定性和拷贝数均有明显提高,同时外源基因的表达量也获得了一定程度的提高.在此基础上,进一步构建了带有不同表达元件的pHR系列载体,使得外源基因能够通过同源重组在酿酒酵母中快速、方便地克隆和表达.
利用同源重組的方法,構建瞭具有高拷貝數和高穩定性的新型釀酒酵母錶達質粒.對酵母附加體型載體pHC11進行一繫列改造,得到質粒pHC11R,併用適噹的酶切線性化;利用PCR反應得到人IFNα2b錶達單元片段,它的兩耑和線性化的pHC11R的兩耑具有50 bp左右的同源區段.上述兩箇片段共轉化釀酒酵母,在酵母體內經同源重組後得到錶達質粒pHC11R-IFNα2b,該錶達質粒與pHC11-IFNα2b相比去除瞭質粒上用于在大腸桿菌中複製和篩選所需的序列,在宿主菌中的穩定性和拷貝數均有明顯提高,同時外源基因的錶達量也穫得瞭一定程度的提高.在此基礎上,進一步構建瞭帶有不同錶達元件的pHR繫列載體,使得外源基因能夠通過同源重組在釀酒酵母中快速、方便地剋隆和錶達.
이용동원중조적방법,구건료구유고고패수화고은정성적신형양주효모표체질립.대효모부가체형재체pHC11진행일계렬개조,득도질립pHC11R,병용괄당적매절선성화;이용PCR반응득도인IFNα2b표체단원편단,타적량단화선성화적pHC11R적량단구유50 bp좌우적동원구단.상술량개편단공전화양주효모,재효모체내경동원중조후득도표체질립pHC11R-IFNα2b,해표체질립여pHC11-IFNα2b상비거제료질립상용우재대장간균중복제화사선소수적서렬,재숙주균중적은정성화고패수균유명현제고,동시외원기인적표체량야획득료일정정도적제고.재차기출상,진일보구건료대유불동표체원건적pHR계렬재체,사득외원기인능구통과동원중조재양주효모중쾌속、방편지극륭화표체.
