微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
3期
455-458
,共4页
葛世超%王磊%李小红%亓苏伟%杨苏声
葛世超%王磊%李小紅%亓囌偉%楊囌聲
갈세초%왕뢰%리소홍%기소위%양소성
苜蓿中华根瘤菌%耐盐%表达%纯化
苜蓿中華根瘤菌%耐鹽%錶達%純化
목숙중화근류균%내염%표체%순화
苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM与耐盐有关的1.9kb DNA片段含有两个开放阅读框,采用PCR方法分别将它们扩增,连接到穿梭质粒上,并进行了耐盐功能检测,证明其中的ORF2具有耐盐性,定名为rstA基因.将它分别克隆到表达载体pThio-HisA、B和C上,构建成重组质粒pGSA、pGSB和pGSC,转化大肠杆菌(Escherichia coli)Top10后,经IPTG诱导,pGSA获得高效表达.表达蛋白占菌体总蛋白的36%,但大多数以包涵体形式存在.对表达产物依次进行ProBondTM树脂亲和纯化、饱和硫酸铵盐析,最后得到纯度为95%的融合蛋白.SDS-PAGE显示纯化的蛋白质为分子量43kD的单一蛋白带,经Western blot检测证实了表达结果.
苜蓿中華根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM與耐鹽有關的1.9kb DNA片段含有兩箇開放閱讀框,採用PCR方法分彆將它們擴增,連接到穿梭質粒上,併進行瞭耐鹽功能檢測,證明其中的ORF2具有耐鹽性,定名為rstA基因.將它分彆剋隆到錶達載體pThio-HisA、B和C上,構建成重組質粒pGSA、pGSB和pGSC,轉化大腸桿菌(Escherichia coli)Top10後,經IPTG誘導,pGSA穫得高效錶達.錶達蛋白佔菌體總蛋白的36%,但大多數以包涵體形式存在.對錶達產物依次進行ProBondTM樹脂親和純化、飽和硫痠銨鹽析,最後得到純度為95%的融閤蛋白.SDS-PAGE顯示純化的蛋白質為分子量43kD的單一蛋白帶,經Western blot檢測證實瞭錶達結果.
목숙중화근류균(Sinorhizobium meliloti)042BM여내염유관적1.9kb DNA편단함유량개개방열독광,채용PCR방법분별장타문확증,련접도천사질립상,병진행료내염공능검측,증명기중적ORF2구유내염성,정명위rstA기인.장타분별극륭도표체재체pThio-HisA、B화C상,구건성중조질립pGSA、pGSB화pGSC,전화대장간균(Escherichia coli)Top10후,경IPTG유도,pGSA획득고효표체.표체단백점균체총단백적36%,단대다수이포함체형식존재.대표체산물의차진행ProBondTM수지친화순화、포화류산안염석,최후득도순도위95%적융합단백.SDS-PAGE현시순화적단백질위분자량43kD적단일단백대,경Western blot검측증실료표체결과.
