军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2007年
3期
204-207,249
,共5页
李婧%付汉江%朱捷%邢瑞云%凌世淦%孙志贤%郑晓飞
李婧%付漢江%硃捷%邢瑞雲%凌世淦%孫誌賢%鄭曉飛
리청%부한강%주첩%형서운%릉세감%손지현%정효비
RNA干涉载体%双向启动子%随机RNA干涉文库%基因文库%质粒
RNA榦涉載體%雙嚮啟動子%隨機RNA榦涉文庫%基因文庫%質粒
RNA간섭재체%쌍향계동자%수궤RNA간섭문고%기인문고%질립
目的:利用双向启动子型RNA干涉载体pRHU构建随机RNA干涉文库.方法:分别构建基于pRHU载体的绿色荧光蛋白EGFP和p53的干涉质粒,验证双向启动子型RNA干涉载体的可用性.设计合成满足pRHU载体特点的干涉文库随机模板,经PCR扩增克隆入pRHU载体,转化感受态细胞获取随机干涉文库.随机挑选20个菌落测序,评价随机文库质量.结果:双向启动子型RNA干涉载体pRHU能在哺乳动物细胞中对外源基因EGFP和内源基因p53进行有效的干涉,表明该载体是一个有效的干涉载体,可以用于构建随机RNA干涉文库.本研究采用的构建策略可在较短时间内,用50 μg pRHU载体获得4×106个克隆.随机挑选20个克隆测序结果表明均插入了GN17-19序列,并且不存在序列重复性.结论:采用本研究的构建策略可以简便快速地利用双向启动子型干涉载体成功构建随机RNA干涉文库,为进一步筛选功能基因奠定了基础.
目的:利用雙嚮啟動子型RNA榦涉載體pRHU構建隨機RNA榦涉文庫.方法:分彆構建基于pRHU載體的綠色熒光蛋白EGFP和p53的榦涉質粒,驗證雙嚮啟動子型RNA榦涉載體的可用性.設計閤成滿足pRHU載體特點的榦涉文庫隨機模闆,經PCR擴增剋隆入pRHU載體,轉化感受態細胞穫取隨機榦涉文庫.隨機挑選20箇菌落測序,評價隨機文庫質量.結果:雙嚮啟動子型RNA榦涉載體pRHU能在哺乳動物細胞中對外源基因EGFP和內源基因p53進行有效的榦涉,錶明該載體是一箇有效的榦涉載體,可以用于構建隨機RNA榦涉文庫.本研究採用的構建策略可在較短時間內,用50 μg pRHU載體穫得4×106箇剋隆.隨機挑選20箇剋隆測序結果錶明均插入瞭GN17-19序列,併且不存在序列重複性.結論:採用本研究的構建策略可以簡便快速地利用雙嚮啟動子型榦涉載體成功構建隨機RNA榦涉文庫,為進一步篩選功能基因奠定瞭基礎.
목적:이용쌍향계동자형RNA간섭재체pRHU구건수궤RNA간섭문고.방법:분별구건기우pRHU재체적록색형광단백EGFP화p53적간섭질립,험증쌍향계동자형RNA간섭재체적가용성.설계합성만족pRHU재체특점적간섭문고수궤모판,경PCR확증극륭입pRHU재체,전화감수태세포획취수궤간섭문고.수궤도선20개균락측서,평개수궤문고질량.결과:쌍향계동자형RNA간섭재체pRHU능재포유동물세포중대외원기인EGFP화내원기인p53진행유효적간섭,표명해재체시일개유효적간섭재체,가이용우구건수궤RNA간섭문고.본연구채용적구건책략가재교단시간내,용50 μg pRHU재체획득4×106개극륭.수궤도선20개극륭측서결과표명균삽입료GN17-19서렬,병차불존재서렬중복성.결론:채용본연구적구건책략가이간편쾌속지이용쌍향계동자형간섭재체성공구건수궤RNA간섭문고,위진일보사선공능기인전정료기출.
