免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2007年
3期
291-294
,共4页
张琴%李明远%张林%蒋忠华%祁志荣%李虹
張琴%李明遠%張林%蔣忠華%祁誌榮%李虹
장금%리명원%장림%장충화%기지영%리홍
铜绿假单胞菌外毒素%PE38KDEL%原核表达
銅綠假單胞菌外毒素%PE38KDEL%原覈錶達
동록가단포균외독소%PE38KDEL%원핵표체
目的 构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定.方法 采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL,重组载体经过限制性内切酶酶切、PCR扩增鉴定及DNA序列测定证实插入片段正确后,转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后及蛋白免疫印迹法分别测定其大小和特异性.结果 经鉴定证实原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL构建成功,且在大肠杆菌BL21中获得了PE38KDEL与GST的融合表达,且表达蛋白产物的分子质量大小与预期值一致,并可被PE的特异性抗体所识别.结论 PE38KDEL在大肠杆菌中获得了高效的融合表达,为下一步研究其功能奠定了基础.
目的 構建銅綠假單胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)的原覈錶達載體併對其錶達的蛋白進行鑒定.方法 採用PCR方法擴增本實驗所需要的PE38KDEL基因片段,再通過酶切及連接反應構建原覈錶達載體pGEX-4T-1-PE38KDEL,重組載體經過限製性內切酶酶切、PCR擴增鑒定及DNA序列測定證實插入片段正確後,轉化感受態大腸桿菌BL21,經IPTG誘導錶達,錶達產物經SDS-PAGE電泳後及蛋白免疫印跡法分彆測定其大小和特異性.結果 經鑒定證實原覈錶達載體pGEX-4T-1-PE38KDEL構建成功,且在大腸桿菌BL21中穫得瞭PE38KDEL與GST的融閤錶達,且錶達蛋白產物的分子質量大小與預期值一緻,併可被PE的特異性抗體所識彆.結論 PE38KDEL在大腸桿菌中穫得瞭高效的融閤錶達,為下一步研究其功能奠定瞭基礎.
목적 구건동록가단포균외독소연생물(PE38KDEL)적원핵표체재체병대기표체적단백진행감정.방법 채용PCR방법확증본실험소수요적PE38KDEL기인편단,재통과매절급련접반응구건원핵표체재체pGEX-4T-1-PE38KDEL,중조재체경과한제성내절매매절、PCR확증감정급DNA서렬측정증실삽입편단정학후,전화감수태대장간균BL21,경IPTG유도표체,표체산물경SDS-PAGE전영후급단백면역인적법분별측정기대소화특이성.결과 경감정증실원핵표체재체pGEX-4T-1-PE38KDEL구건성공,차재대장간균BL21중획득료PE38KDEL여GST적융합표체,차표체단백산물적분자질량대소여예기치일치,병가피PE적특이성항체소식별.결론 PE38KDEL재대장간균중획득료고효적융합표체,위하일보연구기공능전정료기출.
