中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2008年
1期
10-14
,共5页
高玉龙%刘伟%高宏雷%邓小芸%李铁强%王笑梅%沈荣显
高玉龍%劉偉%高宏雷%鄧小蕓%李鐵彊%王笑梅%瀋榮顯
고옥룡%류위%고굉뢰%산소예%리철강%왕소매%침영현
三框cDNA文库%cDNA表达文库%法氏囊%B淋巴细胞%传染性法氏囊病毒(IBDV)
三框cDNA文庫%cDNA錶達文庫%法氏囊%B淋巴細胞%傳染性法氏囊病毒(IBDV)
삼광cDNA문고%cDNA표체문고%법씨낭%B림파세포%전염성법씨낭병독(IBDV)
分离纯化3周龄SPF鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,以5'端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接3种读码框的Adapter,层析柱分级纯化,通过BP重组反应分别构建3种读码框的cDNA入门文库,平均滴度分别为1×105 CFU/mL、1×105CFU/mL、1.2×105CFU/mL,文库总容量分别为1.2×106CFU、1.2×106CFU、1.5×106CFU,平均插入片段分别为1 270 bp、1 190 bp和1 120 bp,阳性重组率均为100%.将3种读码框的cDNA入门文库扩增后提取质粒,取等量的质粒通过LR重组反应将入门文库转换为三框表达文库,经测定平均滴度为1×105CFU/mL,文库总容量为1.2×106CFU,平均插入片段为1 017 bp,阳性重组率为100%.结果表明所构建的三框cDNA表达文库具有较高的重组率和较大的库容量,为进一步筛选鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)在法氏囊B淋巴细胞中的受体及研究细胞嗜性奠定了基础.
分離純化3週齡SPF鷄法氏囊B淋巴細胞的mRNA,以5'耑生物素標記的Oligo(dT)primer為引物反轉錄後連接3種讀碼框的Adapter,層析柱分級純化,通過BP重組反應分彆構建3種讀碼框的cDNA入門文庫,平均滴度分彆為1×105 CFU/mL、1×105CFU/mL、1.2×105CFU/mL,文庫總容量分彆為1.2×106CFU、1.2×106CFU、1.5×106CFU,平均插入片段分彆為1 270 bp、1 190 bp和1 120 bp,暘性重組率均為100%.將3種讀碼框的cDNA入門文庫擴增後提取質粒,取等量的質粒通過LR重組反應將入門文庫轉換為三框錶達文庫,經測定平均滴度為1×105CFU/mL,文庫總容量為1.2×106CFU,平均插入片段為1 017 bp,暘性重組率為100%.結果錶明所構建的三框cDNA錶達文庫具有較高的重組率和較大的庫容量,為進一步篩選鷄傳染性法氏囊病病毒(IBDV)在法氏囊B淋巴細胞中的受體及研究細胞嗜性奠定瞭基礎.
분리순화3주령SPF계법씨낭B림파세포적mRNA,이5'단생물소표기적Oligo(dT)primer위인물반전록후련접3충독마광적Adapter,층석주분급순화,통과BP중조반응분별구건3충독마광적cDNA입문문고,평균적도분별위1×105 CFU/mL、1×105CFU/mL、1.2×105CFU/mL,문고총용량분별위1.2×106CFU、1.2×106CFU、1.5×106CFU,평균삽입편단분별위1 270 bp、1 190 bp화1 120 bp,양성중조솔균위100%.장3충독마광적cDNA입문문고확증후제취질립,취등량적질립통과LR중조반응장입문문고전환위삼광표체문고,경측정평균적도위1×105CFU/mL,문고총용량위1.2×106CFU,평균삽입편단위1 017 bp,양성중조솔위100%.결과표명소구건적삼광cDNA표체문고구유교고적중조솔화교대적고용량,위진일보사선계전염성법씨낭병병독(IBDV)재법씨낭B림파세포중적수체급연구세포기성전정료기출.
