药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2008年
2期
86-89
,共4页
杨华凤%潘明洁%吕敏%李越希
楊華鳳%潘明潔%呂敏%李越希
양화봉%반명길%려민%리월희
丙型肝炎病毒%非结构区5B蛋白%RNA依赖的RNA聚合酶%克隆%表达
丙型肝炎病毒%非結構區5B蛋白%RNA依賴的RNA聚閤酶%剋隆%錶達
병형간염병독%비결구구5B단백%RNA의뢰적RNA취합매%극륭%표체
构建HCU C端截短21个氨基酸的.NS5B(HCV NS5B-C21)的重组原核表达质粒,并获得HCVNS5B-C21蛋白,为以其为靶位的抗HCV药物筛选等创造条件.利用PCR技术扩增HCVNS5B-C21基因,BamHⅠ和Xho Ⅰ双酶酶切后连接到经同样酶酶切的原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,获得阳性重组质粒pET-28a(+)-NSSB-C21,IFTG诱导表达,亲和层析法纯化目的蛋白表达产物经SDS-PAGE进行鉴定.成功构建了HCV NSSB蛋白表达载体pET-28a(+)-NS5B-C21,经诱导明显表达出6His-NS5B-C21,截短形式的6His-NS5D-C21表达产物的可溶性明显增加.HCV NS5B-C21蛋白在体外得到了有效表达,表达的蛋白主要存在于上清液中,纯化获得了NS5B-C21蛋白,为抗HCV药物筛选等奠定基础.
構建HCU C耑截短21箇氨基痠的.NS5B(HCV NS5B-C21)的重組原覈錶達質粒,併穫得HCVNS5B-C21蛋白,為以其為靶位的抗HCV藥物篩選等創造條件.利用PCR技術擴增HCVNS5B-C21基因,BamHⅠ和Xho Ⅰ雙酶酶切後連接到經同樣酶酶切的原覈錶達載體pET-28a(+)上,轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌株,穫得暘性重組質粒pET-28a(+)-NSSB-C21,IFTG誘導錶達,親和層析法純化目的蛋白錶達產物經SDS-PAGE進行鑒定.成功構建瞭HCV NSSB蛋白錶達載體pET-28a(+)-NS5B-C21,經誘導明顯錶達齣6His-NS5B-C21,截短形式的6His-NS5D-C21錶達產物的可溶性明顯增加.HCV NS5B-C21蛋白在體外得到瞭有效錶達,錶達的蛋白主要存在于上清液中,純化穫得瞭NS5B-C21蛋白,為抗HCV藥物篩選等奠定基礎.
구건HCU C단절단21개안기산적.NS5B(HCV NS5B-C21)적중조원핵표체질립,병획득HCVNS5B-C21단백,위이기위파위적항HCV약물사선등창조조건.이용PCR기술확증HCVNS5B-C21기인,BamHⅠ화Xho Ⅰ쌍매매절후련접도경동양매매절적원핵표체재체pET-28a(+)상,전화대장간균BL21(DE3)균주,획득양성중조질립pET-28a(+)-NSSB-C21,IFTG유도표체,친화층석법순화목적단백표체산물경SDS-PAGE진행감정.성공구건료HCV NSSB단백표체재체pET-28a(+)-NS5B-C21,경유도명현표체출6His-NS5B-C21,절단형식적6His-NS5D-C21표체산물적가용성명현증가.HCV NS5B-C21단백재체외득도료유효표체,표체적단백주요존재우상청액중,순화획득료NS5B-C21단백,위항HCV약물사선등전정기출.
