中华实验和临床感染病杂志（电子版）
中華實驗和臨床感染病雜誌（電子版）
중화실험화림상감염병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL INFECTIOUS DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
2008年
3期
162-168
,共7页
李志群%马英骥%成军%王琳%刘妍%洪源%伦永志%李晓东
李誌群%馬英驥%成軍%王琳%劉妍%洪源%倫永誌%李曉東
리지군%마영기%성군%왕림%류연%홍원%륜영지%리효동
乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白%克隆%生物信息学分析
乙型肝炎病毒錶麵抗原中蛋白%剋隆%生物信息學分析
을형간염병독표면항원중단백%극륭%생물신식학분석
目的 克隆乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)结合蛋白1(MBP1)基因,构建其真核表达载体并应用生物信息学技术初步探讨其结构及功能.方法 应用PCR技术从HepG2细胞提取的cDNA扩增MBP1基因,选用pGEM-T载体进行TA克隆,通过PCR及限制性酶切分析及测序进行鉴定,并应用生物信息学初步分析其物理化学性质、蛋白质结构域、功能及染色体定位.结果 成功从HepG2细胞提取并逆转录的cDNA扩增出MBP1基因,其编码区为201个核苷酸(nt),编码产物由66个氨基酸残基(aa)组成,进行GenBank同源序列搜寻发现其与已知基因序列和蛋白序列之间无显著同源性,属于未知功能的新基因,并成功进行TA克隆,经酶切和测序验证正确后亚克隆至pcDNATM3.1/myc-His A真核表达载体,生物信息学分析此基因位于第12号染色体,其编码产物分子量为16645.7,理论 pI为 5.33,半衰期为4.4 h(体外哺乳类网状细胞),属于不稳定蛋白,疏水指数较高,含潜在的2个螺旋区域和1个β折叠,预测其可能包含2个蛋白激酶C磷酸化作用位点、2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点和2个N-豆蔻酰化位点并推测其可能具有不紧密的球蛋白结构,具有信号肽及2个跨膜结构域.结论 发现并成功克隆了乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白结合蛋白1(MBP1)基因,为以后研究此基因的生物学功能及其在HBV损害肝细胞等方面的具体作用提供了新线索.
目的 剋隆乙型肝炎病毒錶麵抗原中蛋白(MHBs)結閤蛋白1(MBP1)基因,構建其真覈錶達載體併應用生物信息學技術初步探討其結構及功能.方法 應用PCR技術從HepG2細胞提取的cDNA擴增MBP1基因,選用pGEM-T載體進行TA剋隆,通過PCR及限製性酶切分析及測序進行鑒定,併應用生物信息學初步分析其物理化學性質、蛋白質結構域、功能及染色體定位.結果 成功從HepG2細胞提取併逆轉錄的cDNA擴增齣MBP1基因,其編碼區為201箇覈苷痠(nt),編碼產物由66箇氨基痠殘基(aa)組成,進行GenBank同源序列搜尋髮現其與已知基因序列和蛋白序列之間無顯著同源性,屬于未知功能的新基因,併成功進行TA剋隆,經酶切和測序驗證正確後亞剋隆至pcDNATM3.1/myc-His A真覈錶達載體,生物信息學分析此基因位于第12號染色體,其編碼產物分子量為16645.7,理論 pI為 5.33,半衰期為4.4 h(體外哺乳類網狀細胞),屬于不穩定蛋白,疏水指數較高,含潛在的2箇螺鏇區域和1箇β摺疊,預測其可能包含2箇蛋白激酶C燐痠化作用位點、2箇酪蛋白激酶Ⅱ燐痠化作用位點和2箇N-豆蔻酰化位點併推測其可能具有不緊密的毬蛋白結構,具有信號肽及2箇跨膜結構域.結論 髮現併成功剋隆瞭乙型肝炎病毒錶麵抗原中蛋白結閤蛋白1(MBP1)基因,為以後研究此基因的生物學功能及其在HBV損害肝細胞等方麵的具體作用提供瞭新線索.
목적 극륭을형간염병독표면항원중단백(MHBs)결합단백1(MBP1)기인,구건기진핵표체재체병응용생물신식학기술초보탐토기결구급공능.방법 응용PCR기술종HepG2세포제취적cDNA확증MBP1기인,선용pGEM-T재체진행TA극륭,통과PCR급한제성매절분석급측서진행감정,병응용생물신식학초보분석기물이화학성질、단백질결구역、공능급염색체정위.결과 성공종HepG2세포제취병역전록적cDNA확증출MBP1기인,기편마구위201개핵감산(nt),편마산물유66개안기산잔기(aa)조성,진행GenBank동원서렬수심발현기여이지기인서렬화단백서렬지간무현저동원성,속우미지공능적신기인,병성공진행TA극륭,경매절화측서험증정학후아극륭지pcDNATM3.1/myc-His A진핵표체재체,생물신식학분석차기인위우제12호염색체,기편마산물분자량위16645.7,이론 pI위 5.33,반쇠기위4.4 h(체외포유류망상세포),속우불은정단백,소수지수교고,함잠재적2개라선구역화1개β절첩,예측기가능포함2개단백격매C린산화작용위점、2개락단백격매Ⅱ린산화작용위점화2개N-두구선화위점병추측기가능구유불긴밀적구단백결구,구유신호태급2개과막결구역.결론 발현병성공극륭료을형간염병독표면항원중단백결합단백1(MBP1)기인,위이후연구차기인적생물학공능급기재HBV손해간세포등방면적구체작용제공료신선색.
