CAJ | 학술논문

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)的壳是生物矿化组织的杰出代表,其中的生物矿化蛋白质对其结构和性能发挥了关键性的作用.鉴于对皱纹盘鲍生物矿化功能基因信息研究的缺乏,文中采用SMART(Switching Mechanism At 5'end of RNA Transcript)技术,构建皱纹盘鲍外套膜组织的全长cDNA表达文库.按Trizol试剂盒的操作程序提取皱纹盘鲍外套膜组织总RNA,以此为模板,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD-PCR法合成双链cDNA.双链cDNA产物经SfiⅠ酶切和ChromaSpin 400柱分级分离后,与λTriplEx2载体进行连接,体外蛋白包装,即获得皱纹盘鲍外套膜cDNA原始文库.测定其滴度为1.2×106 pfu/mL,重组率为95%.PCR扩增方法测得插入cDNA片段长度在0.5～2 kb之间,平均为1.4 kb.进行文库的扩增,扩增后的cDNA文库的滴度为4×109 pfu/mL,重组率93.6%.
추문반포(Haliotis discus hannai Ino)적각시생물광화조직적걸출대표,기중적생물광화단백질대기결구화성능발휘료관건성적작용.감우대추문반포생물광화공능기인신식연구적결핍,문중채용SMART(Switching Mechanism At 5'end of RNA Transcript)기술,구건추문반포외투막조직적전장cDNA표체문고.안Trizol시제합적조작정서제취추문반포외투막조직총RNA,이차위모판,통과PowerScript역전록매역전록합성제일련cDNA;재이제일련cDNA산물위모판,용LD-PCR법합성쌍련cDNA.쌍련cDNA산물경SfiⅠ매절화ChromaSpin 400주분급분리후,여λTriplEx2재체진행련접,체외단백포장,즉획득추문반포외투막cDNA원시문고.측정기적도위1.2×106 pfu/mL,중조솔위95%.PCR확증방법측득삽입cDNA편단장도재0.5～2 kb지간,평균위1.4 kb.진행문고적확증,확증후적cDNA문고적적도위4×109 pfu/mL,중조솔93.6%.