重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2009年
5期
586-589
,共4页
付红敏%许峰%黄波%杨鸣%符跃强%方芳%匡凤梧
付紅敏%許峰%黃波%楊鳴%符躍彊%方芳%劻鳳梧
부홍민%허봉%황파%양명%부약강%방방%광봉오
胎鼠%肺泡Ⅱ型上皮细胞%原代培养%分离
胎鼠%肺泡Ⅱ型上皮細胞%原代培養%分離
태서%폐포Ⅱ형상피세포%원대배양%분리
目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell type Ⅱ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础.方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AEC Ⅱ,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C(Surfactant protein c,SPC)的表达.结果:每3～5只胎鼠可获得AEC Ⅱ(36 ± 5)× 106,活力98%±2%.镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长,外观呈多边形或立方形.透射电镜可见特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为96%±3%,呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96%以上.结论:利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AEC Ⅱ,能满足体外进一步实验的需要.
目的:探討胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞(Alveolar epithelial cell type Ⅱ,AECⅡ)的分離、純化及原代培養方法,為有關胎兒肺髮育及新生兒肺部疾病的研究奠定基礎.方法:採用胰酶結閤膠原酶的消化方法,分離肺組織細胞成份,然後經差速離心和差速貼壁的方法純化AEC Ⅱ,進行原代培養;通過檯盼藍染色檢測細胞活力,倒置相差顯微鏡觀察細胞生長特點及形態特徵,透射電鏡鑒定,改良巴氏染色檢測細胞純度以及免疫熒光技術檢測錶麵蛋白C(Surfactant protein c,SPC)的錶達.結果:每3～5隻胎鼠可穫得AEC Ⅱ(36 ± 5)× 106,活力98%±2%.鏡下觀察原代AECⅡ呈島狀生長,外觀呈多邊形或立方形.透射電鏡可見特徵性的闆層小體,改良巴氏染色見胞質內有較多顆粒,純度為96%±3%,呈現SPC綠色免疫熒光的細胞佔96%以上.結論:利用胰酶和膠原酶消化,以及差速離心和差速貼壁的方法可成功分離齣高產量、高純度的胎鼠AEC Ⅱ,能滿足體外進一步實驗的需要.
목적:탐토태서폐포Ⅱ형상피세포(Alveolar epithelial cell type Ⅱ,AECⅡ)적분리、순화급원대배양방법,위유관태인폐발육급신생인폐부질병적연구전정기출.방법:채용이매결합효원매적소화방법,분리폐조직세포성빈,연후경차속리심화차속첩벽적방법순화AEC Ⅱ,진행원대배양;통과태반람염색검측세포활력,도치상차현미경관찰세포생장특점급형태특정,투사전경감정,개량파씨염색검측세포순도이급면역형광기술검측표면단백C(Surfactant protein c,SPC)적표체.결과:매3～5지태서가획득AEC Ⅱ(36 ± 5)× 106,활력98%±2%.경하관찰원대AECⅡ정도상생장,외관정다변형혹립방형.투사전경가견특정성적판층소체,개량파씨염색견포질내유교다과립,순도위96%±3%,정현SPC록색면역형광적세포점96%이상.결론:이용이매화효원매소화,이급차속리심화차속첩벽적방법가성공분리출고산량、고순도적태서AEC Ⅱ,능만족체외진일보실험적수요.
