黑龙江畜牧兽医
黑龍江畜牧獸醫
흑룡강축목수의
HEILONGJIANG JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE
2009年
4期
19-21
,共3页
成纤维细胞%细胞分离培养%性别鉴定%牛
成纖維細胞%細胞分離培養%性彆鑒定%牛
성섬유세포%세포분리배양%성별감정%우
为了探索和建立牛胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法,试验取自怀孕40 d的奶牛胎儿耳组织用组织块贴附法进行原代培养和传代培养,用倒置相差显微镜观察成纤维细胞形态;根据牛Y染色体上的性别决定区域(SRY)基因序列设计合成1对PCR引物作为性别鉴定引物, 同时根据牛403 bp的β-珠蛋白基因序列设计1对引物作为内参照引物,建立PCR 反应体系进行性别鉴定.结果表明:分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖;阳性对照和第1牛胎儿成纤维细胞系PCR鉴定扩增得到255 bp的片段和403 bp的β-珠蛋白基因片段,第2,3牛胎儿成纤维细胞系和母牛血液PCR扩增只得到403 bp的β-珠蛋白基因片段,通过电泳证明PCR产物255 bp的片段为SRY基因片段,说明有255 bp扩增带的细胞系为雄性;无255 bp扩增带的细胞系为雌性.结果说明该方法所获得的牛胎儿成纤维细胞可在体外稳定培养,利用PCR鉴定牛胎儿性别具有简单、快速、准确的特点,可应用于基因克隆动物研究中体细胞系的早期性别鉴定.
為瞭探索和建立牛胎兒成纖維細胞體外分離培養及性彆鑒定的技術方法,試驗取自懷孕40 d的奶牛胎兒耳組織用組織塊貼附法進行原代培養和傳代培養,用倒置相差顯微鏡觀察成纖維細胞形態;根據牛Y染色體上的性彆決定區域(SRY)基因序列設計閤成1對PCR引物作為性彆鑒定引物, 同時根據牛403 bp的β-珠蛋白基因序列設計1對引物作為內參照引物,建立PCR 反應體繫進行性彆鑒定.結果錶明:分離的成纖維細胞可在體外快速貼壁生長、增殖;暘性對照和第1牛胎兒成纖維細胞繫PCR鑒定擴增得到255 bp的片段和403 bp的β-珠蛋白基因片段,第2,3牛胎兒成纖維細胞繫和母牛血液PCR擴增隻得到403 bp的β-珠蛋白基因片段,通過電泳證明PCR產物255 bp的片段為SRY基因片段,說明有255 bp擴增帶的細胞繫為雄性;無255 bp擴增帶的細胞繫為雌性.結果說明該方法所穫得的牛胎兒成纖維細胞可在體外穩定培養,利用PCR鑒定牛胎兒性彆具有簡單、快速、準確的特點,可應用于基因剋隆動物研究中體細胞繫的早期性彆鑒定.
위료탐색화건립우태인성섬유세포체외분리배양급성별감정적기술방법,시험취자부잉40 d적내우태인이조직용조직괴첩부법진행원대배양화전대배양,용도치상차현미경관찰성섬유세포형태;근거우Y염색체상적성별결정구역(SRY)기인서렬설계합성1대PCR인물작위성별감정인물, 동시근거우403 bp적β-주단백기인서렬설계1대인물작위내삼조인물,건립PCR 반응체계진행성별감정.결과표명:분리적성섬유세포가재체외쾌속첩벽생장、증식;양성대조화제1우태인성섬유세포계PCR감정확증득도255 bp적편단화403 bp적β-주단백기인편단,제2,3우태인성섬유세포계화모우혈액PCR확증지득도403 bp적β-주단백기인편단,통과전영증명PCR산물255 bp적편단위SRY기인편단,설명유255 bp확증대적세포계위웅성;무255 bp확증대적세포계위자성.결과설명해방법소획득적우태인성섬유세포가재체외은정배양,이용PCR감정우태인성별구유간단、쾌속、준학적특점,가응용우기인극륭동물연구중체세포계적조기성별감정.
