中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2010年
7期
638-641
,共4页
杜军伟%王远志%陈创夫%葛阳春%唐利燕
杜軍偉%王遠誌%陳創伕%葛暘春%唐利燕
두군위%왕원지%진창부%갈양춘%당리연
实时定量PCR%siRNA%小鼠RAW264.7巨噬细胞%FTH1
實時定量PCR%siRNA%小鼠RAW264.7巨噬細胞%FTH1
실시정량PCR%siRNA%소서RAW264.7거서세포%FTH1
目的 通过实时定量 PCR(real-time PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(siRNA)抑制目的 基因表达的方法.方法 化学设计合成对应于FTH1 (ferritin heavy chain 1, FTH1)基因表达mRNA的siRNA,经TurboFectTM in vitro Transfection Reagent转染小鼠RAW264.7巨噬细胞,48h后,提取总RNA,逆转录为cDNA.以3-磷酸甘油醛脱氢酶 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参,定量检测FTH1的表达,比较干扰前后FTH1基因mRNA的量.结果 3种siRNA处理的小鼠巨噬细胞中FTH1基因的表达抑制率最高为97.60%.结论 实时定量PCR方法的建立为研究布鲁氏菌在侵染巨噬细胞过程中FTH1的功能提供了有效途径.
目的 通過實時定量 PCR(real-time PCR)檢測基因錶達的mRNA,建立一種直接觀察小榦擾RNA(siRNA)抑製目的 基因錶達的方法.方法 化學設計閤成對應于FTH1 (ferritin heavy chain 1, FTH1)基因錶達mRNA的siRNA,經TurboFectTM in vitro Transfection Reagent轉染小鼠RAW264.7巨噬細胞,48h後,提取總RNA,逆轉錄為cDNA.以3-燐痠甘油醛脫氫酶 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)為內參,定量檢測FTH1的錶達,比較榦擾前後FTH1基因mRNA的量.結果 3種siRNA處理的小鼠巨噬細胞中FTH1基因的錶達抑製率最高為97.60%.結論 實時定量PCR方法的建立為研究佈魯氏菌在侵染巨噬細胞過程中FTH1的功能提供瞭有效途徑.
목적 통과실시정량 PCR(real-time PCR)검측기인표체적mRNA,건립일충직접관찰소간우RNA(siRNA)억제목적 기인표체적방법.방법 화학설계합성대응우FTH1 (ferritin heavy chain 1, FTH1)기인표체mRNA적siRNA,경TurboFectTM in vitro Transfection Reagent전염소서RAW264.7거서세포,48h후,제취총RNA,역전록위cDNA.이3-린산감유철탈경매 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)위내삼,정량검측FTH1적표체,비교간우전후FTH1기인mRNA적량.결과 3충siRNA처리적소서거서세포중FTH1기인적표체억제솔최고위97.60%.결론 실시정량PCR방법적건립위연구포로씨균재침염거서세포과정중FTH1적공능제공료유효도경.
