中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
7期
598-602
,共5页
栾怡%于修平%赵蔚明%周亚滨%白晓卉
欒怡%于脩平%趙蔚明%週亞濱%白曉卉
란이%우수평%조위명%주아빈%백효훼
人乳头状瘤病毒%siRNA%子宫颈肿瘤%细胞生长
人乳頭狀瘤病毒%siRNA%子宮頸腫瘤%細胞生長
인유두상류병독%siRNA%자궁경종류%세포생장
目的优化HPV-16 E6癌基因特异的U6质粒表达的siRNA,抑制HPV癌基因表达及其对子宫颈癌细胞生长繁殖的影响.方法选择4个分别针对HPV-16E6mRNA外显子和内含子序列为靶序列,合成DNA链,构建表达HPV-16E6短发卡样dsRNA的重组pSilencer1.0-U6载体,导入HPV-16 DNA阳性的宫颈癌细胞株CaSki中,观察该细胞中HPV-16 E6、E7基因表达水平及其蛋白含量的变化,并观察细胞生长被抑制的情况.结果4种HPV-16E6 siRNA均能降低宫颈癌细胞CaSki的生长速率.通过细胞生长曲线观察到HPV-16 E6 shRNA表达质粒导入细胞0-96 h内,可降低细胞生长速度.荧光定量RT-PCR检测HPV-16 E6 siRNA可使宫颈癌细胞株CaSki中HPV-16 E6、E7基因转录的mRNA水平降低,其中针对E6 mRNA内含子的重组shRNA只抑制E6基因的表达水平.West-ern blot分析表明,4个HPV-16E6siRNA作用72 h后,未能检测到宫颈癌细胞中HPV-16E6蛋白.结论HPV-16 E6siRNA能使宫颈癌细胞CaSki生长缓慢;选择针对E6内含子的siRNA作用位点,特异性抑制E6表达;而针对E6外显子的siRNA作用位点,可抑制E6和E7基因的表达,是用于治疗HPV阳性宫颈癌细胞的理想靶位.
目的優化HPV-16 E6癌基因特異的U6質粒錶達的siRNA,抑製HPV癌基因錶達及其對子宮頸癌細胞生長繁殖的影響.方法選擇4箇分彆針對HPV-16E6mRNA外顯子和內含子序列為靶序列,閤成DNA鏈,構建錶達HPV-16E6短髮卡樣dsRNA的重組pSilencer1.0-U6載體,導入HPV-16 DNA暘性的宮頸癌細胞株CaSki中,觀察該細胞中HPV-16 E6、E7基因錶達水平及其蛋白含量的變化,併觀察細胞生長被抑製的情況.結果4種HPV-16E6 siRNA均能降低宮頸癌細胞CaSki的生長速率.通過細胞生長麯線觀察到HPV-16 E6 shRNA錶達質粒導入細胞0-96 h內,可降低細胞生長速度.熒光定量RT-PCR檢測HPV-16 E6 siRNA可使宮頸癌細胞株CaSki中HPV-16 E6、E7基因轉錄的mRNA水平降低,其中針對E6 mRNA內含子的重組shRNA隻抑製E6基因的錶達水平.West-ern blot分析錶明,4箇HPV-16E6siRNA作用72 h後,未能檢測到宮頸癌細胞中HPV-16E6蛋白.結論HPV-16 E6siRNA能使宮頸癌細胞CaSki生長緩慢;選擇針對E6內含子的siRNA作用位點,特異性抑製E6錶達;而針對E6外顯子的siRNA作用位點,可抑製E6和E7基因的錶達,是用于治療HPV暘性宮頸癌細胞的理想靶位.
목적우화HPV-16 E6암기인특이적U6질립표체적siRNA,억제HPV암기인표체급기대자궁경암세포생장번식적영향.방법선택4개분별침대HPV-16E6mRNA외현자화내함자서렬위파서렬,합성DNA련,구건표체HPV-16E6단발잡양dsRNA적중조pSilencer1.0-U6재체,도입HPV-16 DNA양성적궁경암세포주CaSki중,관찰해세포중HPV-16 E6、E7기인표체수평급기단백함량적변화,병관찰세포생장피억제적정황.결과4충HPV-16E6 siRNA균능강저궁경암세포CaSki적생장속솔.통과세포생장곡선관찰도HPV-16 E6 shRNA표체질립도입세포0-96 h내,가강저세포생장속도.형광정량RT-PCR검측HPV-16 E6 siRNA가사궁경암세포주CaSki중HPV-16 E6、E7기인전록적mRNA수평강저,기중침대E6 mRNA내함자적중조shRNA지억제E6기인적표체수평.West-ern blot분석표명,4개HPV-16E6siRNA작용72 h후,미능검측도궁경암세포중HPV-16E6단백.결론HPV-16 E6siRNA능사궁경암세포CaSki생장완만;선택침대E6내함자적siRNA작용위점,특이성억제E6표체;이침대E6외현자적siRNA작용위점,가억제E6화E7기인적표체,시용우치료HPV양성궁경암세포적이상파위.
