CAJ | 학술논문

目的探讨携带外源基因的慢病毒在体外有效感染胰岛及外源基因在胰岛中的表达,为通过移植前向胰岛细胞转入特定的免疫调节分子基因诱导胰岛移植物耐受奠定基础.方法将目的基因CTLA4Ig导入慢病毒载体pWPTS,构建成pWPTS-CTLA4Ig载体.用磷酸钙沉淀法将pWPTS-EGFP、pWPTS-CTLA4Ig分别和其辅助载体pMD2.G、pCMV△8.92共转染293T细胞,收获病毒上清液,测定病毒滴度后感染新分离的胰岛.通过Western Blot测定胰岛培养上清液中CTLA4Ig蛋白的表达.结果①成功构建了携带CTLA4Ig基因的慢病毒载体pWPTS-CTLA4Ig;②包装产生的慢病毒Lenti-EGFP、Lenti-CTLA4Ig在体外可以感染胰岛,其中在Lenti-EGFP慢病毒感染的胰岛观察到了绿色荧光,及在Lenti-CTLA4Ig慢病毒感染的胰岛培养上清液中检测到了CTLA4Ig蛋白的表达.结论慢病毒在体外可以有效感染大鼠胰岛,且携带的外源基因可以在胰岛细胞中稳定表达,其中Lenti-CTLA4Ig慢病毒感染的胰岛为进行胰岛移植并诱导体内特异的胰岛移植物耐受奠定了基础.
목적탐토휴대외원기인적만병독재체외유효감염이도급외원기인재이도중적표체,위통과이식전향이도세포전입특정적면역조절분자기인유도이도이식물내수전정기출.방법장목적기인CTLA4Ig도입만병독재체pWPTS,구건성pWPTS-CTLA4Ig재체.용린산개침정법장pWPTS-EGFP、pWPTS-CTLA4Ig분별화기보조재체pMD2.G、pCMV△8.92공전염293T세포,수획병독상청액,측정병독적도후감염신분리적이도.통과Western Blot측정이도배양상청액중CTLA4Ig단백적표체.결과①성공구건료휴대CTLA4Ig기인적만병독재체pWPTS-CTLA4Ig;②포장산생적만병독Lenti-EGFP、Lenti-CTLA4Ig재체외가이감염이도,기중재Lenti-EGFP만병독감염적이도관찰도료록색형광,급재Lenti-CTLA4Ig만병독감염적이도배양상청액중검측도료CTLA4Ig단백적표체.결론만병독재체외가이유효감염대서이도,차휴대적외원기인가이재이도세포중은정표체,기중Lenti-CTLA4Ig만병독감염적이도위진행이도이식병유도체내특이적이도이식물내수전정료기출.