CAJ | 학술논문

[目的]为解决溶栓后再栓塞问题,构建N-端含RGD(Arg-Gly-Asp)序列的葡激酶双功能突变体.研究突变体的表达和纯化,并进行性质分析.[方法]将突变后的葡激酶突变体序列连入pBV220质粒,转化大肠杆菌BL21进行表达.阳离子交换、凝胶过滤和阴离子交换三步层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定,并测定纯化产物对血小板聚集的抑制效应.[结果]PAGE扫描结果显示,葡激酶突变体蛋白在大肠杆菌BL21中的表达量约占菌体蛋白总量的40%～50%;三步层析纯化后,HPLC测定其纯度可达95%.酪蛋白凝胶板溶圈法测得其比活性分别为10.8×104和11.0×104HU/mg,与野生型葡激酶活性相当;且具有明显的抗血小板聚集活性,血小板聚集仪测定其血小板聚集抑制率分别为10.72%和19.71%,明显高于野生型葡激酶血小板聚集抑制率.本实验利用pBV220载体高效表达了葡激酶突变体基因,得到了高纯度、高活性的突变体蛋白,为葡激酶生产产业化和临床应用奠定了良好的基础.
[목적]위해결용전후재전새문제,구건N-단함RGD(Arg-Gly-Asp)서렬적포격매쌍공능돌변체.연구돌변체적표체화순화,병진행성질분석.[방법]장돌변후적포격매돌변체서렬련입pBV220질립,전화대장간균BL21진행표체.양리자교환、응효과려화음리자교환삼보층석법순화표체산물,채용용권법대순화산물진행생물학활성측정,병측정순화산물대혈소판취집적억제효응.[결과]PAGE소묘결과현시,포격매돌변체단백재대장간균BL21중적표체량약점균체단백총량적40%～50%;삼보층석순화후,HPLC측정기순도가체95%.락단백응효판용권법측득기비활성분별위10.8×104화11.0×104HU/mg,여야생형포격매활성상당;차구유명현적항혈소판취집활성,혈소판취집의측정기혈소판취집억제솔분별위10.72%화19.71%,명현고우야생형포격매혈소판취집억제솔.본실험이용pBV220재체고효표체료포격매돌변체기인,득도료고순도、고활성적돌변체단백,위포격매생산산업화화림상응용전정료량호적기출.