上海交通大学学报(医学版)
上海交通大學學報(醫學版)
상해교통대학학보(의학판)
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2009年
2期
236-240
,共5页
郜尽%王海侠%李京敬%俞雁
郜儘%王海俠%李京敬%俞雁
고진%왕해협%리경경%유안
酵母双杂交%β-半乳糖苷酶%蛋白互作%酶活测定
酵母雙雜交%β-半乳糖苷酶%蛋白互作%酶活測定
효모쌍잡교%β-반유당감매%단백호작%매활측정
目的 建立标准的酵母双杂交系统报告基因表达的β-半乳糖苷酶活性测定方法.方法 采用o-硝基-β-D-半乳糖苷(ONPG)为底物,以液氮反复冻融破碎酵母细胞壁,通过比较不同测定时间、接种阳性克隆数目、转化方法以及酵母株对β-半乳糖苷酶酶活的影响,确定最佳酶活测定条件. 结果相同条件下,单个克隆之间的酶活有差异,相对标准偏差(RSD)＞8%;相同条件下,Y187酵母株比AH109酵母株酶活高18～20倍,并且本底水平很低甚至没有;双倍体酵母的酶活介于两个单倍体酵母之间,同预计一致;质粒顺序转化与共转化在AH109 中差异有统计学意义(P＜0.001),而在Y187中没有明显差异(P＞0.05). 结论测定酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶的活性宜采用Y187酵母株,酶活变化范围大,本底小,受转化方法影响小,测定时选取5个以上阳性克隆混合培养更有利于酶活的准确测定.
目的 建立標準的酵母雙雜交繫統報告基因錶達的β-半乳糖苷酶活性測定方法.方法 採用o-硝基-β-D-半乳糖苷(ONPG)為底物,以液氮反複凍融破碎酵母細胞壁,通過比較不同測定時間、接種暘性剋隆數目、轉化方法以及酵母株對β-半乳糖苷酶酶活的影響,確定最佳酶活測定條件. 結果相同條件下,單箇剋隆之間的酶活有差異,相對標準偏差(RSD)＞8%;相同條件下,Y187酵母株比AH109酵母株酶活高18～20倍,併且本底水平很低甚至沒有;雙倍體酵母的酶活介于兩箇單倍體酵母之間,同預計一緻;質粒順序轉化與共轉化在AH109 中差異有統計學意義(P＜0.001),而在Y187中沒有明顯差異(P＞0.05). 結論測定酵母雙雜交報告基因β-半乳糖苷酶的活性宜採用Y187酵母株,酶活變化範圍大,本底小,受轉化方法影響小,測定時選取5箇以上暘性剋隆混閤培養更有利于酶活的準確測定.
목적 건립표준적효모쌍잡교계통보고기인표체적β-반유당감매활성측정방법.방법 채용o-초기-β-D-반유당감(ONPG)위저물,이액담반복동융파쇄효모세포벽,통과비교불동측정시간、접충양성극륭수목、전화방법이급효모주대β-반유당감매매활적영향,학정최가매활측정조건. 결과상동조건하,단개극륭지간적매활유차이,상대표준편차(RSD)＞8%;상동조건하,Y187효모주비AH109효모주매활고18～20배,병차본저수평흔저심지몰유;쌍배체효모적매활개우량개단배체효모지간,동예계일치;질립순서전화여공전화재AH109 중차이유통계학의의(P＜0.001),이재Y187중몰유명현차이(P＞0.05). 결론측정효모쌍잡교보고기인β-반유당감매적활성의채용Y187효모주,매활변화범위대,본저소,수전화방법영향소,측정시선취5개이상양성극륭혼합배양경유리우매활적준학측정.
