山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2012年
4期
249-253
,共5页
徐慧%李玉云%禹莉%房鹏%刘艳萍%顾宗江
徐慧%李玉雲%禹莉%房鵬%劉豔萍%顧宗江
서혜%리옥운%우리%방붕%류염평%고종강
协同刺激分子%B7-H4%基因转染细胞
協同刺激分子%B7-H4%基因轉染細胞
협동자격분자%B7-H4%기인전염세포
目的 克隆人B7-H4基因,构建人B7-H4基因转染细胞株并初步研究其对T细胞的作用. 方法 通过RT-PCR的方法获得人B7-H4分子的基因,将目的片段双酶切(EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ)后与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4并进行鉴定；脂质体转染法将重组载体导人L929细胞,经G418加压筛选并通过流式细胞术和RT-PCR检测表达载体是否转入L929细胞中,通过检测活化T细胞上CD25,CD69的表达及T细胞增殖实验对B7-H4转基因细胞的生物学功能进行初步研究. 结果 从外周血活化单核细胞中扩增出目的基因,构建重组表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4并将其转染至L929细胞,构建了一株稳定表达人B7 -H4分子的基因转染细胞株,对其生物学功能的研究显示B7-H4分子可以下调活化T细胞上CD25,CD69的表达,并且对T细胞的活化增殖起到抑制作用(P＜0.05). 结论 成功构建了稳定表达B7-H4分子的基因转染细胞株,为进一步研制B7-H4分子的单克隆抗体提供了有效的免疫原.
目的 剋隆人B7-H4基因,構建人B7-H4基因轉染細胞株併初步研究其對T細胞的作用. 方法 通過RT-PCR的方法穫得人B7-H4分子的基因,將目的片段雙酶切(EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ)後與pIRES2-EGFP真覈錶達載體連接,構建重組真覈錶達載體pIRES2-EGFP-B7-H4併進行鑒定；脂質體轉染法將重組載體導人L929細胞,經G418加壓篩選併通過流式細胞術和RT-PCR檢測錶達載體是否轉入L929細胞中,通過檢測活化T細胞上CD25,CD69的錶達及T細胞增殖實驗對B7-H4轉基因細胞的生物學功能進行初步研究. 結果 從外週血活化單覈細胞中擴增齣目的基因,構建重組錶達載體pIRES2-EGFP-B7-H4併將其轉染至L929細胞,構建瞭一株穩定錶達人B7 -H4分子的基因轉染細胞株,對其生物學功能的研究顯示B7-H4分子可以下調活化T細胞上CD25,CD69的錶達,併且對T細胞的活化增殖起到抑製作用(P＜0.05). 結論 成功構建瞭穩定錶達B7-H4分子的基因轉染細胞株,為進一步研製B7-H4分子的單剋隆抗體提供瞭有效的免疫原.
목적 극륭인B7-H4기인,구건인B7-H4기인전염세포주병초보연구기대T세포적작용. 방법 통과RT-PCR적방법획득인B7-H4분자적기인,장목적편단쌍매절(EcoR Ⅰ화BamH Ⅰ)후여pIRES2-EGFP진핵표체재체련접,구건중조진핵표체재체pIRES2-EGFP-B7-H4병진행감정；지질체전염법장중조재체도인L929세포,경G418가압사선병통과류식세포술화RT-PCR검측표체재체시부전입L929세포중,통과검측활화T세포상CD25,CD69적표체급T세포증식실험대B7-H4전기인세포적생물학공능진행초보연구. 결과 종외주혈활화단핵세포중확증출목적기인,구건중조표체재체pIRES2-EGFP-B7-H4병장기전염지L929세포,구건료일주은정표체인B7 -H4분자적기인전염세포주,대기생물학공능적연구현시B7-H4분자가이하조활화T세포상CD25,CD69적표체,병차대T세포적활화증식기도억제작용(P＜0.05). 결론 성공구건료은정표체B7-H4분자적기인전염세포주,위진일보연제B7-H4분자적단극륭항체제공료유효적면역원.
