中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2007年
9期
523-527
,共5页
黄清玲%柏世玉%王林%陈婉南%林建银%林旭
黃清玲%柏世玉%王林%陳婉南%林建銀%林旭
황청령%백세옥%왕림%진완남%림건은%림욱
肝炎病毒%乙型%转染%病毒复制%细胞系%肿瘤
肝炎病毒%乙型%轉染%病毒複製%細胞繫%腫瘤
간염병독%을형%전염%병독복제%세포계%종류
目的 建立HBV HepG2肝细胞株,使HBV能长期稳定地表达抗原并复制.方法 将含完整转录单位的1.2倍体HBV DNA经SalⅠ位点克隆入真核表达载体pREP10,构建的重组载体pREP-HBV以Lipofectamine2000转染HepG2细胞,250 μg/mL潮霉素筛选抗性细胞克隆.ELISA检测细胞上清液中的HBsAg和HBeAg.电子显微镜下观察细胞上清液HBV颗粒.制备HBV特异性探针,以Southern印迹法检测细胞株内HBV核心颗粒DNA.结果 获得含1.2倍体HBVDNA的重组载体,即pREP-HBV,该重组载体转染HepG2细胞后,获得5株潮霉素抗性细胞RHBV1～RHBV5,均能表达HBsAg和HBeAg.Southern印迹结果显示各株细胞均可见明显的杂交拖带,即存在HBV DNA复制中间体.细胞培养上清液浓缩后在电子显微镜下可见成簇的、直径约42 nm的HBV颗粒及直径为22～26 nm的球形颗粒.结论 成功建立了HBV稳定复制及表达的HepG2细胞株,目前细胞已传代50次,每3天1次.
目的 建立HBV HepG2肝細胞株,使HBV能長期穩定地錶達抗原併複製.方法 將含完整轉錄單位的1.2倍體HBV DNA經SalⅠ位點剋隆入真覈錶達載體pREP10,構建的重組載體pREP-HBV以Lipofectamine2000轉染HepG2細胞,250 μg/mL潮黴素篩選抗性細胞剋隆.ELISA檢測細胞上清液中的HBsAg和HBeAg.電子顯微鏡下觀察細胞上清液HBV顆粒.製備HBV特異性探針,以Southern印跡法檢測細胞株內HBV覈心顆粒DNA.結果 穫得含1.2倍體HBVDNA的重組載體,即pREP-HBV,該重組載體轉染HepG2細胞後,穫得5株潮黴素抗性細胞RHBV1～RHBV5,均能錶達HBsAg和HBeAg.Southern印跡結果顯示各株細胞均可見明顯的雜交拖帶,即存在HBV DNA複製中間體.細胞培養上清液濃縮後在電子顯微鏡下可見成簇的、直徑約42 nm的HBV顆粒及直徑為22～26 nm的毬形顆粒.結論 成功建立瞭HBV穩定複製及錶達的HepG2細胞株,目前細胞已傳代50次,每3天1次.
목적 건립HBV HepG2간세포주,사HBV능장기은정지표체항원병복제.방법 장함완정전록단위적1.2배체HBV DNA경SalⅠ위점극륭입진핵표체재체pREP10,구건적중조재체pREP-HBV이Lipofectamine2000전염HepG2세포,250 μg/mL조매소사선항성세포극륭.ELISA검측세포상청액중적HBsAg화HBeAg.전자현미경하관찰세포상청액HBV과립.제비HBV특이성탐침,이Southern인적법검측세포주내HBV핵심과립DNA.결과 획득함1.2배체HBVDNA적중조재체,즉pREP-HBV,해중조재체전염HepG2세포후,획득5주조매소항성세포RHBV1～RHBV5,균능표체HBsAg화HBeAg.Southern인적결과현시각주세포균가견명현적잡교타대,즉존재HBV DNA복제중간체.세포배양상청액농축후재전자현미경하가견성족적、직경약42 nm적HBV과립급직경위22～26 nm적구형과립.결론 성공건립료HBV은정복제급표체적HepG2세포주,목전세포이전대50차,매3천1차.
